- Йога начинающим видео
- Хулахуп танец видео
- Смотреть моя тренировка видео
- Видео тренировки александра емельяненко
- Как правильно крутить обруч на бедрах видео
- Тренировки в кудо видео
- Тренировки рой джонса видео
- Йога онлайн смотреть видео
- Тренировки костя дзю видео
- Видео тренировки роя джонса
- Видео спинальной
- Айенгар йога видео
- Йога для женщин на видео
- Правильно крутить обруч видео
- Плиометрические отжимания видео
- Новости
Управление Здравоохранения Евпаторийского городского совета (С)2011
67 гостей
Циркулює пухлинні клітини І ДЕЯКІ МОРФО-імуногістохімічними ПОКАЗНИКИ ПРИ колоректальний рак
1 Непомняща Е.М. 1 Кіт О.І. 1 Ністратова О.В. 1 Новикова И.А. 1 Нікіпєлова Е.А. 1 Бахтін А.В. 1 Ульянова Є.П. 1 Вострикова Ж.І. 1 Селютина О.Н. 1
1 ФГБУ «Ростовський Науково-Дослідний Онкологічний Інститут» МОЗ РФ
Вивчено вміст циркулюючих пухлинних клітин (ЦПК) в периферичної крові 40 хворих на колоректальний рак. У досліджених хворих було виявлено підвищений рівень циркулюючих пухлинних клітин (ЦОК)> 3 клітин (від 3 до 400 клітин в зразку) в 75% випадків. Всі пухлини по своїй гистоструктура були аденокарциномами, різного ступеня діффернціровкі (висока, помірна, низька). Визначено співвідношення між змістом ЦОК і деякими морфо-імуногістохімічними показниками (проліферативною активністю Ki-67, фактором апоптозу р53, ангіогенезу CD31 і адгезії ММП-2). Морфологічні зміни в пухлині можна було порівняти з клінічними проявами у вигляді виникнення ранніх рецидивів і метастазів в терміни до 24 місяців. Отримані результати дослідження важливі для розуміння механізмів прогресії раку товстої кишки і є прогностичними.
колоректальний рак
циркулюючі пухлинні клітини
морфо-імуногістохімічні показники.
1. Архипова О. Є., Черногубова Е. А., Ліхтанська Н. В., Тарасов В. А., Кіт О. І., Матішов Д. Г. Аналіз народження онкологічних захворювань в Ростовській області. Просторово-часова статистика // Фундаментальні дослідження. - 2013. - № 7-3. - С. 504-510.
2. Архипова О. Є., Черногубова Е. А., Тарасов В. А., Ліхтанська Н. В., Кіт О. І., Єремєєва А. А., Матішов Д. Г. Рівень онкологічних захворювань як індикатор медико- екологічної безпеки території (на прикладі Ростовської області) // Вісник Південного наукового центру РАН. - 2013. - Т. 9. - № 3. - С.7-14.
3. Зенюкова Т. В., Перевощиков А. Г., Кузьмичов Д. В., Барсуков Ю. А. Ядерний проліферативний антиген і ступінь лікувального патоморфозу в клітинах аденокарциноми анального каналу після комплексного лікування // Російський онкологічний журнал. - 2015. - № 5. - С.42-46.
4. Кіт О. І. Проблема колоректального раку XXI століття: досягнення і перспективи // Російський журнал гастроентерології, гепатології, колопроктології. - 2013. - Т. 23. - № 3. - С.65-71.
5. Кіт О. І., Новикова І. А., Бахтін А. В., Нікіпєлова Е. А., Шатова Ю. С., Габараева В. М., Ністратова О. В. Перший досвід детекції циркулюючих пухлинних клітин в периферичної крові // Міжнародний журнал експериментального освіти. - 2013. - № 11. - С. 37-39.
6. Колесник А. П. Прогностичне значення експресії р53 у хворих з ранніми стадіями недрібноклітинного раку легені // Онкологія. - 2013. - Т. 15. - № 1. - С.20-23.
7. Нефедова Н. А., Мальков П. Г. Роль стовбурових клітин в канцерогенезі товстої кишки // Онкологічна колопроктологія. - 2015. - 3. - Т. 5. - С.15-24.
8. Петров С. В., Райхлин Н. Т. Керівництво по імуногістохімічної діагностики пухлин людини. - Казань, 2012. - С. 84,409.
9. Старостіна М. А., Афанасьєва З. А., Зінкевич О. Д., Сафіна Н. А. металлопротеінази ММП-9 і їх тканинні інгібітори TIMP-1 в копрофильтратах у хворих на рак товстої кишки // Російський онкологічний журнал. - 2011. - № 6. - С.38-39.
10. Хомяков Е. А. Динамічне спостереження хворих на колоректальний рак після радикальних операцій // Колопроктології. - 2015. - № 2 (52). - С.57-67.
11. Roy Beveridge. Circulating tumor cell in management of metastatic breast cancer patients // Community onkology. - 2007. - № 2. - pр.79-82.
Колоректальний рак займає одне з провідних місць в структурі онкологічної захворюваності та смертності [1,2,4]. Тільки в Росії щорічно реєструється до 60000 нових випадків на рік. У 30-50% хворих з II і III стадією захворювання після радикальних операцій протягом перших п'яти років виникають рецидиви і / або метастази [1,2,4]. У зв'язку з цим актуальним залишається питання прогнозування розвитку останніх. Пухлинну прогресію визначають кілька механізмів: проліферативна активність, чинники апоптозу, ангіогенезу. Вони відповідають за ріст і розвиток пухлини, здатності до інвазії і метастазування. Одним з провідних чинників в ангіогенезі є матриксних металлопротеінази (ММП). ММП відносяться до сімейства цинкових металопротеїназ, функція яких пов'язана з обміном білків міжклітинної матриксу [9]. Їм належать функції активації, інактивації і модифікації великої кількості молекул, які контролюють процеси інвазії, метастазування і ангіогенезу [9].
Підвищена експресія ММП спостерігається практично у всіх злоякісних пухлинах і асоціюється з агресивним перебігом захворювання і несприятливим прогнозом. ММП з певною вибірковістю гидролизуют всі основні компоненти сполучнотканинного матриксу (СТМ). Тканинні колагенази: ММП-1, ММП-8, ММП-13 - гидролизуют фібрилярні колагенази - основу соединительнотканного матриксу, забезпечуючи розвиток процесу інвазії. Активність ММП в клітці реалізується різними механізмами: транскрипцією, активацією білка і взаємодією з тканинними інгібіторами матриксних металопротеїназ (ТІММП) .ММП-2 і ММП-9 - гидролизуют колаген IV типу - основу базальних мембран, яка забезпечує відділення ендотеліальних клітин від мембран з наступною їх міграцією та участю в процесі ангіогенезу. ММП-2 і ММП-9 вивільняють ряд ангіогенних факторів, пов'язаних з сполучнотканинним матриксом [8,9]. Показано, що у хворих з аденокарциномою легкого, виявлено значний рівень експресії ММП-2 і ММП-9 пухлинними клітинами, що обумовлює високу інвазивність пухлини, аналогічні дані отримані і при ракових пухлинах шлунка [4,8].
Ступінь васкуляризації пухлини є потужним чинником, що сприяє придбанню пухлиною метастатичного потенціалу як на ранніх, так і на пізніх стадіях. При метастазуванні гематогенним шляхом пухлинні клітини повинні прикріпитися до ендотелію, вийти в просвіт судини, вижити в циркулюючої крові, зупинитися в будь-якої віддаленої тканини і утворити там клон [5].
Іншим, не менш важливим, маркером потенціалу пухлини є білок р53. Р53 виконує три основні функції: регуляцію клітинного циклу, індукцію апоптозу (у випадках, коли пошкодження ДНК клітини не можуть бути репарирувати), стабілізацію генома. Порушення регуляції клітинного циклу, пов'язане зі зміною активності р53, веде до розвитку і прогресуванню злоякісного процесу. Мутації гена p53 ведуть до «надекспресія» цього білка, які імуногістохімічним шляхом виявляються за допомогою анти-р53 антитіл. Вважається, що імуногістохімічна позитивна реакція повністю залежить від наявності мутантного типу р53 [6].
Прогнозувати перебіг пухлинного процесу можливо, з використанням одного з маркерів проліферативної активності ki-67. У багатьох великих дослідженнях за течією пухлин різних локалізацій показано, що ki-67 є універсальним фактором прогнозу рецедівірованія і загальної безрецидивної виживаності [3].
Не менш важливим показником розвитку пухлинної прогресії є мікросудинна інвазія пухлини, яку імуногістохімічно можна виявити за допомогою антитіл до CD31. За рівнем експресії CD 31 проводиться підрахунок щільності мікросудин в пухлині, яка є важливим прогностичним ознакою [8].
Ще одним із маркерів прогресування пухлинного процесу є циркулюючі в крові пухлинні клітини, збільшення кількості яких може стати приводом до більш ретельному обстеженню пацієнтів в «досімптомном періоді» [5,8,10]. У проведених багатоцентрових рандомізованих дослідженнях показана роль підвищення рівня ЦОК в розвитку пухлинної прогресії при раку молочної залози, передміхурової залози і колоректальний рак. У ряді країн Заходу даний параметр використовується для корекції хіміотерапії (скасування, зміна лінії і т.д.) [11].
Мета дослідження: вивчити експресію деяких імуногістохімічних маркерів (ki-67, р53, CD31, ММП-2) в залежності від кількості циркулюючих пухлинних клітин у хворих з раковими пухлинами товстої кишки.
Матеріали і методи дослідження: в дослідження були включені 40 хворих (20 чоловіків і 20 жінок) у віці від 50 до 72 років з IIIB стадією колоректального раку. Матеріалом для дослідження служили віддалені пухлини товстого кишечника (після радикальної операції) і венозна кров з периферичної вени (в доопераційному періоді). Вивчали кількість циркулюючих пухлинних клітин в венозної крові з використанням системи CellSearch ™, що складається з двох приладів: станції пробопідготовки і аналізатора. Принцип роботи станції заснований на підрахунку кількості епітеліальних пухлинних клітин, виділених з крові. Ідентифікація клітин здійснюється за допомогою флюоресцентної мічених антитіл до цитокератин (СК8, СК18, СК19), общелейкоцітарному антигену CD45 і ядерного барвника DAPI. Аналіз заснований на іммуномагнітном збагаченні клітин за допомогою металевих наночастинок, покритих полімерним шаром, що містить антитіла до EpCAM молекулам (маркери епітеліальних клітин) з подальшою імунофлуоресцентній ідентифікацією зібраних в магнітному полі клітин. Імуногістохімічне дослідження проводили на зрізах з парафінових блоків, призначених для стандартного морфологічного дослідження, за допомогою моноклональних антитіл ki-67, р53, CD31, ММП-2 фірми Dako. Парафінові зрізи Депарафінірованние і регідратованих за стандартною методикою. «Демаскування» антигенів проводили в PT-LinkThermo. Протокол включав в себе попереднє нагрівання до 65 ° C, відновлення антигену протягом 20 хвилин при температурі 97 ° C і подальше охолодження до 65 ° C. Потім скла промивали протягом 1-3 хвилин TBS-буфером (Dako) і поміщали в автостейнер Thermo Scientific для фарбування в автоматичному режимі. Для візуалізації імуногістохімічної реакції використовували систему детекції RevealPolyvalent HRP-DAB DetectionSystem. Зрізи дофарбовували гематоксилином Майера, для укладення використовували бальзам Bio-Mount. Оцінку експресії маркерів вивчали як мінімум на 10 випадково обраних полях зору з застосуванням світлового мікроскопа ZeissAxioImager M2 під збільшенням х10, х40.
У дослідженні застосовували такі критерії оцінки маркерів:
1) пухлина вважали негативною по р53, якщо в тканини пухлини була відсутня ядерна реакція з антитілами або кількість забарвлених клітин було менше 25%, і позитивної по р53, якщо було пофарбовано більше 25% ядер пухлинних клітин;
2) для оцінки проліферативної активності (ПА) пухлини підраховували кількість ki-67-позитивних пухлинних клітин, що припадають на 200-300 пухлинних клітин. Індекс ki-67 визначали за формулою:
ПА = число ki-67 позитивних клітин х 100 / загальна кількість клітин.
Маркери проліферативної активності розцінювали на основі найбільш часто використовується метод оцінки проліферативної активності: 0% - 20% - низька проліферативна активність, 21% - 50% - помірна проліферативна активність, 51% -100% - висока проліферативна активність;
3) Для оцінки ангіогенезу в пухлинах використовували індекс внутрішньопухлинно мікросудинної щільності (intratumormicrovesseldensity - MVD). Мікросудин фарбували антитілом CD31. Кількість судин визначали в кожному полі зору препарату при використанні об'єктива х40 з використанням програми AxioVs40 v-4.8.1.0.
Статистичний аналіз результатів дослідження проводився за допомогою програми STATISTICA 7.0 (StatSoftInc., США) і MedCalc (версія 9.3.5.0).
Результати дослідження та їх обговорення: у досліджених хворих було виявлено підвищений рівень ЦОК> 3 клітин (від 3 до 400 клітин в зразку) в 75% випадків. За стандартами, що застосовуються до дослідження ЦОК, зразок вважається позитивним, при будь-якій кількості ЦОК більшому, ніж 3 клітини. При цьому у більшого числа пацієнтів (42,5%) з високим рівнем ЦОК при морфологічному дослідженні операційного матеріалу була діагностована низькодиференційованих аденокарцинома. Співвідношення кількості ЦОК зі ступенем диференціювання пухлини показана в таблиці 1.
Таблиця 1
Залежність кількості ЦОК в периферичної крові від ступеня диференціювання пухлини
Ступінь диференціювання пухлини
Кількість хворих (абсолютні числа,%)
з ЦОК> 3n = 30
Кількість хворих (абсолютні числа,%)
з ЦОК <3n = 10
високодиференційована аденокарцинома
5 (12,5%)
3 (7,5%)
помірно аденокарцинома
9 (25%)
5 (10%)
низькодиференційованих аденокарцинома
16 (42,5%) *
2 (2,5%) *
Примітка: * - статистично значуща відмінність виявлення у хворих з ЦОК> 3 і <3с низькодиференційований аденокарциномой, р = 0,0235.
Ретроспективний аналіз показав, що ранні рецидиви і метастази (в терміни до 24 місяців) розвивалися частіше у хворих з рівнем ЦОК> 3 клітин.
У 67,5% від загального числа хворих була виражена експресія ММП-2. Висока і помірна проліферативна активність була відзначена в 100% випадків. Експресії р53 була відзначена в 67,5% випадків. CD31 експресуватися в 75% зразків, що відображає виражену мікросудинну інвазію (див. Рис. 1-4). Отримані дані імуногістохімічного дослідження відображені в таблиці 2 і порівняти з рівнем ЦОК.
Таблиця 2
Показники ЦОК і імуногістохімічних маркерів
Експресія ІГХ маркерів
Кількість хворих (абсолютні числа,%)
з ЦОК> 3 (n = 30)
Кількість хворих (абсолютні числа,%)
з ЦОК <3 (n = 10)
Позитивна експресія р53
23 (76,7%) *
4 (40%) *
Відсутність експресії р53
7 (23,7%) **
6 (60%) **
помірна проліферативна активність (ki-67)
10 (33,3%)
3 (30%)
висока проліферативна активність (ki-67)
20 (66,7%)
7 (70%)
Позитивна експресія CD31
28 (93,3%) °
2 (20%) °
Відсутність експресії CD31
2 (6,7%) °°
8 (80%) °°
Позитивна експресія ММП-2
26 (86,7%) '
1 (10%) '
Відсутність експресії ММП-2
4 (13,3%)''
9 (90%)''
Примітка: статистично значущі відмінності при ЦОК <3і> 3 виявлені: * і ** - за експресією р53, р = 0,0383; ° і °° - за експресією CD31, р = 0,00001; 'і' '- за експресією ММП-2, р = 0,0001.
З таблиці 2 видно, що у хворих з високим рівнем ЦОК відзначена позитивна експресія маркерів апоптозу, а також маркерів, що відображають мікросудинну інвазію і метастатичний потенціал пухлини.
Рис.1. Висока проліферативна активність (ki-67) в ракових клітинах. ІГХ-дослідження
Мал. 2. Зміст р53 в ракових клітинах товстої кишки. ІГХ-дослідження
Мал. 3. Експресія CD31. Мікросудинна щільність при колоректальному раку.
ІГХ-дослідження
Мал. 4. Позитивна реакція ММП-2 в ракових клітинах товстої кишки.
ІГХ-дослідження
Висновок: проведене дослідження показало, що кількість ЦОК знаходиться в прямій залежності від маркерів апоптозу (р53) (р = 0,0383), мікросудинної інвазії (CD31) (р = 0,00001), ММП-2 (р = 0,0001) . Дані морфологічні зміни можна було порівняти з клінічними проявами у вигляді виникнення ранніх рецидивів і метастазів (у хворих з підвищеною кількістю ЦОК, метастази і рецидиви виникали в більш ранні терміни). Отримані результати важливі для розуміння механізмів прогресії раку товстої кишки і є прогностичними.
бібліографічна посилання
Непомняща Е.М., Кіт О.І., Ністратова О.В., Новикова И.А., Нікіпєлова Е.А., Бахтін А.В., Ульянова Е.П., Вострикова Ж.І., Селютина Про В.М.. Циркулює пухлинні клітини І ДЕЯКІ МОРФО-імуногістохімічними ПОКАЗНИКИ ПРИ колоректальний рак // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2016. - № 2 .;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=24378 (дата звернення: 01.06.2019).
Пропонуємо вашій увазі журнали, що видаються у видавництві «Академія природознавства»
(Високий імпакт-фактор РИНЦ, тематика журналів охоплює всі наукові напрямки)
Ru/ru/article/view?