Як беруть аналіз ПЦР у чоловіків: особливості методики

1. Як беруть аналіз ПЦР у чоловіків: особливості методики
2. Як проходить реакція
3. Для чого ж проводиться ця реакція
4. Коли використовують цей метод

В даний час для діагностики різних захворювань створено безліч способів. Всі вони мають свої як позитивні, так і негативні сторони. Деякі з них добре підходять для визначення одних маркерів або мікроорганізмів, в той же час їх марно проводити при діагностиці інших захворювань. В силу цього була створена одна методика, яка має досить високу чутливість до багатьох збудників і до різних молекул. Для такої точної діагностики використовується полімеразна ланцюгова реакція.

Дану реакцію можна проводити всім без винятку людям. Для проведення цієї реакції необхідний біологічний матеріал для дослідження. Чоловічі аналізи:

• кров;
• чоловічий мазок слини;
• чоловічий мазок сперми.

У жінок же для дослідження найчастіше забирають, крім крові і слини, виділення зі статевих шляхів. І у тих, і у інших для дослідження можна використовувати спеціальні мазки-відбитки з поверхні слизових оболонок різних органів.

Як беруть аналіз ПЦР у чоловіків: особливості методики

Кінцевим результатом, отриманим в результаті цієї процедури, є певні ділянки ДНК. Для того щоб їх отримати, необхідний певний мінімальний набір компонентів:

1. Досліджуваний матеріал або мазок на ПЦР. Як було сказано вище, для проведення полімеразної ланцюгової реакції необхідна наявність біологічного матеріалу або мазка у чоловіків, в якому будуть міститися ділянки ДНК потрібного нам збудника. Тому і використовуються для дослідження мазки і зіскрібки, кров (найчастіше використовується венозна). Трохи рідше для дослідження беруть вміст різних гнійників або новоутворень.
2. Праймери. Під праймерами розуміють певні точки (стартові і кінцеві), які необхідні для синтезу потрібної ДНК в певних умовах. Для дослідження зазвичай беруть 2 праймера, дія яких - добудова нуклеотидів до ланцюгів.
3. ДНК-полімераза. Цей фермент є вирішальним у проведенні ПЛР. Його дія спрямована на освіту необхідної для дослідження і уточнення ланцюга ДНК. Фермент працює в певних умовах (вкрай важливим і необхідним є те, що він повинен бути стійкий до впливу високих температур, через що його отримують від бактерій, активних тільки при такому навколишньому середовищі).
4. Іони магнію. Вони потрібні для нормальної активності ферменту, тобто вони виступають в ролі каталізатора хімічної реакції синтезу ДНК на отриманих ділянках.
5. Середовище, в якому будуть проходити необхідні реакції. Найчастіше використовується буферний розчин з певною щільністю, кислотністю і іонним складом.
6. Деякі фізичні фактори, такі як: тиск, температура розчину і навколишнього середовища, вологість.

Як проходить реакція

Під дією практично всіх перерахованих вище компонентів реакції з біологічного матеріалу (чоловічий аналіз) виділяються цікавлять нас компоненти ДНК (якщо такі є). При їх наявності реакція триває; якщо ж їх немає, результат реакції вважається негативним. Якщо в біологічному матеріалі присутній ДНК мікроорганізму, починається реакція ампліфікації. Як відомо, нитка ДНК складається з двох ланцюгів, що йдуть паралельно один одному.

Під час реакції ампліфікації відбувається поділ даних ланцюгів на 2 паралельно йдуть ланцюжка нуклеотидів.

На кожну з них сідає праймер, основна мета якого під дією наявної ДНК-полімерази утворити ще одну, ідентичну тій, що була в розчині спочатку, нитка ДНК. Таких ниток, синтезованих в реакції, може утворюватися вкрай багато; єдине ж умова їх освіти - відповідність певним умовам.

Умовно перебіг ПЛР-реакції можна розділити на кілька періодів. У першому періоді денатурації відбувається поділ ДНК під дією високої температури (найчастіше вище 95 градусів). Після того як ланцюга ДНК стануть одноланцюжковий, починається друга стадія - стадія відпалу. Суть даної стадії полягає в зниженні температури середовища для того, щоб праймери могли приєднатися до ниток ДНК і почати синтез. Найчастіше ця стадія займає не більше 30 секунд, хоча доведено, що за цей час встигає синтезуватися досить велика кількість нуклеотидів.

На третій стадії, елонгації, відбувається повна добудова потрібних компонентів кожної з ланцюгів. В кінці реакції настає фаза плато, яка обумовлюється зниженням швидкості синтезу всіх ланцюгів, добудовою всіх одне цепочечних фрагментів. Час її настання, а також тривалість фази елонгації обумовлені кількістю наявних реагентів.

http://youtu.be/I3khKM2ZE_Q

Для чого ж проводиться ця реакція

Областей, в яких найчастіше використовують дану реакцію, досить багато. Вона отримала своє поширення в таких сферах, як:

Коли використовують цей метод

Унікальність реакції ПЛР полягає в тому, що прямих безпосередніх протипоказань до її проведення немає. Сама ж реакція проводиться в таких випадках:

1. Негативні або неправильні результати, отримані при дослідженні іншими методами. Багато реакції не можуть дати повного і розгорнутої відповіді на всі питання, що цікавлять, а деякі так і зовсім марні (наприклад, при діагностиці атипових форм малярії, коли збудник є, а клініка неявна або відсутній). У такому випадку і вдаються до проведення ПЛР.
2. Використання для діагностики різних частинок і фрагментів, взятих після антибіотикотерапії. Часто в результаті лікування антибіотиками в організмі може залишатися певна кількість мікроорганізмів. Так як їх мало, то реакції вони можуть і не викликати, однак наявність подібного "контейнера" ​​сприяє збільшенню ризику розвитку рецидивів захворювання. Після лікування низько чутливими методами такі мікроорганізми не завжди вдається виявити, і тоді на допомогу і приходить ПЛР.
3. Заміна більш дорогих процедур. ПЛР сама по собі є досить витратною процедурою, однак іноді її проведення досить для уточнення діагнозу того чи іншого захворювання без використання ще більш дорогих, а часто і більш нікчемних методів.
4. Виявлення багатьох захворювань, що передаються від партнера до партнера під час статевих зносин. Обумовлюється використання ПЛР при діагностиці венеричних захворювань тим, що багато збудники ІПСШ досить довгий час себе не проявляють. Дослідження мазків-відбитків зі слизових статевих шляхів і сечовипускального каналу дозволяють виявити їх ще до розвитку клінічної картини і почати необхідне лікування якомога раніше.
5. Уточнення онкологічної складової. У багатьох пацієнтів з онкологією не завжди вдається визначити наявність тих чи інших онкомаркерів. ПЛР дозволяє виявити наявність або онкомаркерів, або дефектних клітин, що значно підвищує точність діагностики пухлин.

http://youtu.be/AVU37fmZR48

Аналіз на ПЛР є універсальним методом діагностики. Висока чутливість і точність даної реакції роблять її використання необхідної при багатьох захворюваннях і станах. Єдиним її мінусом можна вважати досить висока затратність. Тому не кожен чоловік за власним бажанням може собі її дозволити. Для найбільш правильних результатів і точної їх інтерпретації необхідно строго дотримуватися всі необхідні умови для даної реакції, так як тоді істотно зростає ризик отримання неправильних ланцюгів ДНК і як наслідок усього - неправильна інтерпретація результатів, які покаже аналіз.