Застосування аналогів гонадотропін-рилізинг-гормону

1. агоністи ГнРГ
2. антагоністи ГнРГ
3. Вивчення рівня рецепторів ГнРГ в гіпофізі і експресії їх мРНК
4. Вивчення антагоністів ГнРГ in vivo
5. Клінічні знахідки
6. Дослідження in vitro впливу антагоністів ГнРГ на гіпофізарні рецептори ГнРГ
7. Вплив цитотоксичних аналогів ГнРГ на гіпофіз
8. Рецептори ГнРГ в пухлинних тканинах
9. Прямий вплив агоністів і антагоністів ГнРГ на пухлини
10. Вплив аналогів ГнРГ на пухлинну проліферацію і рецептори ГнРГ в різних пухлинах
11. рак ендометрія
12. Епітеліальний рак яєчників

Використання агоністів і антагоністів ГнРГ в лікуванні міоми матки

Вплив аналогів ГнРГ на рівень сироваткового лептину і масу тіла у жінок з одиночної міому матки

Механізми дії агоністів ГнРГ, антагоністів і цитотоксичних аналогів рецепторів ГнРГ в гіпофізі і пухлинах

Лікування гіперплазії ендометрія агоністами ГнРГ: дані гістологічні, клінічні і ДНК-цитометрические

Лікування атипової гіперплазії ендометрія прогестинами і аналогами ГнРГ: тривалий період спостереження

P.Vercellini, B.Zaina, L.Trespidi et al.

Infertility and reproductive medicine clinics of North America, 2001., Jan, Vol. 12, No 1, pp. 195-211.

агоністи ГнРГ

Лейоміома матки, що виявляється у 20-25% жінок старше 35 років, викликає клінічні прояви в 20-50%. Менорагія, швидке збільшення обсягу матки, тиск на тазові органи і безпліддя? основні причини оперативного втручання при міомі у жінок в пременопаузі. З використанням агоністів ГнРГ в клінічній практиці, основна увага була сфокусована на потенційну роль цих засобів в якості альтернативи міомектомії і гістеректомії, а також на перевагах їх передопераційного використання. З накопиченням клінічного досвіду стало ясно, що тимчасовий стан гіпоестрогенії в більшості випадків не запобігає необхідності втручання. Однак результати досліджень показали деякі переваги терапії агоністами ГнРГ, особливо в комбінації з хірургією. У цій статті аналізуються доступні в літературі дані про роль даного гормонального лікування у веденні хворих з міомою матки.

антагоністи ГнРГ

Агоністи ГнРГ викликають десенситизацию гіпофіза і змінюють його функцію. Придушення активності передує первинна фаза стимуляції, що триває 1-2 тижні, під час якої ЛГ і ФСГ секретуються в сверхфізіологіческіх кількостях. Теоретично це підвищення несприятливо при лікуванні естроген-залежних станів, таких як міома матки. Антагоністи ГнРГ, на відміну від агоністів, викликають повну блокаду мембранних рецепторів ГнРГ клітин гіпофіза, що продукують гонадотропіни, без попередньої активації (6,14).

Kettel і співавтори (32) першими відзначили вдалий результат лікування антагоністом ГнРГ 7 жінок з клінічно вираженою міомою. Препарат вводили підшкірно в добовій дозі 50 мкг / кг протягом 3 міс. Середній розмір міоми зменшився на 53 + -7% через місяць без подальшої редукції. Як і очікувалося, розміри і міоми і матки повернулися до початкових величин швидко після відміни препарату у тих пацієнток, які не піддалися хірургічної операції.

Gonzales-Barcena et al (31) вводили Cetrorelix в дозі 0,8 мг підшкірно на добу протягом 3 міс, 18 жінкам з міомою, яким була показана гістеректомія. Після закінчення середньої редукції обсягу на 45% міомектомія стала можливою у 12 пацієнток, 3 проведена гістеректомія.

Felberbaum et al (19) вивчали дію депо-форми Cetrorelix пальмоата, 60 мг, введеного внутрішньом'язово на другий день циклу 20 жінкам з клінічно вираженою міомою. Другу дозу вводили через 3-4 тижні. Середній обсяг зменшився на 33,5% і відновився дуже швидко. Вже через 2 тижні після закінчення лікування редукція була 31,3%. 4 пацієнтки змушені були перейти на стандартну терапію агоністами? гозереліна через недостатню супрессии статевих залоз. Решті 16 пацієнткам була проведена успішна консервативна або радикальна операція.

Єдиним гіпотетичним перевагою антагоністів ГнРГ перед їх агоністами в лікуванні міоми матки є виключення фази активації і більш швидке зменшення обсягу матки. Щодо першого переваги треба врахувати той факт, що при початку терапії агоністами ГнРГ в середині лютеїнової фази практично повністю виключається ефект первинної активації.

Агоністи ГнРГ викликають оборотне стан глибокої гіпоестрогенії і аменореї. Їх введення спільно з препаратами заліза ефективно для корекції залізодефіцитної анемії, пов'язаної з менорагією. Нормалізація сироваткового гемоглобіну і гематокриту зменшує необхідність переливання крові та хірургічного втручання. Тривале лікування одночасно з комбінованої стероидной і нестероидной замісною терапією полегшує стан, але може не допомогти радикально з високим хірургічним ризиком і фіксованими показаннями до гістеректомії. Роль агоністів ГнРГ перед абдомінальної міомектомією неясна. У 6 рандомізованих контрольованих дослідженнях не було знайдено достовірних інтраопераційних або постопераційних переваг? ні при лапаротомії, ні при лапароскопії (9, 18, 28, 30, 47, 63). Схожі висновки зроблені щодо застосування агоністів ГнРГ перед гістеректомією, за винятком двох позитивних наслідків, пов'язаних зі зменшенням обсягу матки: можливості проведення поперечного розрізу передньої черевної стінки замість поздовжнього і можливості вагінального доступу замість черевного. Згідно зі статистикою, для проведення одного поперечного розрізу замість продолжного, агоністи ГнРГ треба давати 5 жінкам, а для проведення однієї гістеректомії вагінальним доступом при обсязі матки відповідному 12-18 тижнях гестації? 2 жінкам. (49, 51, 54). У жінок з більшим обсягом матки медикаментозне зменшення обсягу навряд чи дозволить провести операцію вагінальним доступом (51). На підставі висновків 9 рандомізованих контрольованих досліджень (2, 5, 29, 30, 37, 47, 49, 51, 54), різниця в тривалості операції і зменшення крововтрати статистично недостовірні. Агоністи ГнРГ можуть полегшити проведення гістероскопічних міомектомії, особливо при наявності множинних інтрамуральних вузлів, однак на цю тему доступні тільки нерандомізірованние дослідження, і їх якість не дозволяє рекомендувати систематичне використання агоністів ГнРГ перед гістероскопічних резекцією мубмукозной міоми.

Щодо використання антагоністів ГнРГ, ізольовано або в комбінації з хірургією, є мало даних. Чи є виключення фази активації практично значущим для жінок з міомою, залишається під питанням. Ймовірно більш важливо відібрати групу пацієнток, які отримують позитивний ефект від тимчасового стану гіпоестрогенії, щоб саме у них домагатися його повністю, без попередньої фази активації.

AVSchally, G.Halmos, Z.Rekasi, JMArencibia-Jimenez

ГнРГ? головна сполучна ланка між корою головного мозку і гіпофізом в регуляції функції статевих залоз і відіграє ключову роль в репродукції хребетних. Крім того, недавні знахідки показали, що ГнРГ може впливати як фактор зростання в різних пухлинах (15, 17, 19, 63, 91). У 1971р наша лабораторія першою здійснила ізоляцію, очищення і синтез гипоталамического ГнРГ. Ми також показали, що природний ГнРГ і синтетичний декапептид володіють як ФСГ, так і ЛГ-стимулюючої активністю. Ми сформулювали концепцію про те, що один гипоталамический гормон регулює секрецію обох гонадотропінів гіпофізом, зараз вона підтримана безліччю експериментальних і клінічних доказів. Гормон описаний нами як ЛГРГ \ ФСГ-РГ або просто гонадотропін-рилізинг-гормон (ГнРГ), однак у багатьох джерелах

перевага термін ЛГ-РГ, щоб не плутати з гормон росту-рилізинг гормоном.

Вивчення рівня рецепторів ГнРГ в гіпофізі і експресії їх мРНК

Вплив кастрації і агоністів ГнРГ

Чутливість до ГнРГ корелює з числом рецепторів до нього. І навпаки, ГнРГ впливає на рівень рецепторів до нього в гіпофізі за принципом позитивного зворотного зв'язку. Було проведено багато досліджень з приводу впливу різноманітних гормональних стимуляцій? стероїдами, ГнРГ і його аналогами на кількість посттрансляційних рецепторів до ГнРГ. Kaiser et al (46) відзначали, що оваріектомія підвищує рівень мРНК рецепторів ГнРГ в гіпофізі у мишей. In vitro обробка монослойной культури клітин гіпофіза щурів пульсовим додаванням ГнРГ приводила до значного підвищення рівня мРНК рецепторів ГнРГ, в той час як постійна присутність ГнРГ не викликало змін. Masons et al (66) оцінювали вплив ГнРГ і його аналогів на кількість рецепторів ГнРГ і їх мРНК в клітинної лінії гонадотропінів альфа-Т3-1. Інкубація з ГнРГ або його раннім агоністом, але не з антагоністом, знижувало рівень рецепторів ГнРГ по час- і дозозалежного принципом. Зниження рівня мРНК рецепторів ГнРГ також зазначалося після обробки альфа-Т3-1 клітин ГнРГ і агоністами, але зниження рівня мРНК було менш значним, ніж зниження уколічества рецепторів, що дозволяє припустити включеність інших механізмів, таких як руйнування білка, в зниження кількості рецепторів. Kakar et al (49) показали, що додавання 1 мкмоль агоніста ГнРГ до клітинної культурі лінії гонадотрофов клітин альфа-Т3-1 гіпофіза мишей знижує клітинну поліфераціі паралельно зниженню рівня мРНК рецепторів ГнРГ. In vivo лікування лейпролід знижувало рівень ЛГ і значно знижувало рівень мРНК до ГнРГ в гіпофізі овець. Введення пролонгованої форми агоніста ГнРГ щурам також знижувало рівень МРК до гіпофізарний рецепторами ГнРГ протягом як мінімум 30 днів (60). Максимальне зниження мРНК відбувалося через 5 годин після початку лікування. Навпаки, кастрація викликала значне підвищення рівня мРНК ГнРГ (60). Loumaye and Catt домагалися підвищення і зниження рівня рецепторів ГнРГ після тривалого (6-9 годин) витримування культури клітин гіпофіза з агоністом ГнРГ бусереліном. Після обробки субнаномолярнимі дозами число рецепторів ГнРГ підвищувався, високі концентрації агоніста придушували кількість зв'язують ГнРГ рецепторів.

Вивчення антагоністів ГнРГ in vivo

У ранньому дослідженні Heber et al показали, що введення потенційного антагоніста ГнРГ кастрованим дорослим щурам чоловічої статі знижує на 90% рівень сироваткового ЛГ і рецепторів ГнРГ в гіпофізі на 24 години. Автори припустили, що пролонгована in vivo придушення гіпофізарних рецепторів ГнРГ і секреції ЛГ може бути викликано повільною швидкістю від'єднання антагоніста від гіпофізарних рецепторів (37). У нашому дослідженні (8) самцям щурів були імплантовані підшкірно капсули, які виділяють 50 мкг цетрорелікса на добу, протягом 60 днів. Лікування антагоністом знижувало сироваткові рівні ЛГ і тестостерону, однак через 90 днів після припинення лікування рівні ці гормонів повернулися до контрольного. Відразу після припинення лікування Цетрорелікс було виявлено значне пригнічення рівня гіпофізарних рецепторів ГнРГ, проте через 90 днів це явище повністю відновився. Ці знахідки показують, що відновлення рівнів гормонів відбувається паралельно відновленню кількості рецепторів ГнРГ, до нормальних значень.

В іншому дослідженні (79) одноразова підшкірна ін'єкція 1,25 мг цетрорелікса самцям щурів придушувала сироватковий рівень тестостерону і ЛГ і викликала значне пригнічення кількості мембранних рецепторів ГнРГ, що триває протягом 60 днів (таблиця 1). Було також відзначено, що введення 0,5 мг \ кг антагоніста ГнРГ двічі в день щурам протягом 10 днів знижувало на 93% кількість вільних рецепторів ГнРГ. Лікування за допомогою депонованих форм агоніста ГнРГ декапептила або антагоніста цетрорелікса протягом 8 тижнів викликало придушення рівня рецепторів ГнРГ (таблиця 2). (109). Ці дослідження дозволили припустити, що антагоністи ГнРГ, такі як цетрорелікс, викликають блокаду гіпофізарно-гонадальній осі не тільки за рахунок простого заняття рецепторів ГнРГ, але також і за рахунок придушення їх кількості. Вивчали патерн змін кількості та афінності рецепторів ГнРГ в мембранної фракції передньої долі гіпофіза щурів після одноразового введення 100 мкг цетрорелікса (33). Для визначення, чи впливає введення цетрорелікса на концентрацію зв'язуючих ділянок ГнРГ, ми використовували in vitro метод десатурации рецепторів, заснований на застосуванні хлориду марганцю і тиоцианата амонію (33). Через 6 годин після введення цетрорелікса відсоток зайнятих рецепторів ГнРГ склав лише 10% від загального числа рецепторів, пізніше не було визначено зайнятих рецепторів. Це дослідження продемонструвало, що гіпофізарні рецептори ГнРГ у щурів значно пригнічуються не менше ніж на 72 години після введення цетрорелікса. Мінімальна концентрація рецепторів була виявлена ​​через 3-6 годин після ін'єкції цетрорелікса, відновлення числа рецепторів починається через 24 години (рис. 1). Придушення кількості зв'язуючих ділянок ГнРГ, викликане Цетрорелікс, супроводжувалося придушенням сироваткових концентрацій ЛГ і тестостерону (рис. 1). Наші результати продемонстрували, що антагоніст ГнРГ цетрорелікс викликає виражене пригнічення кколічества гіпофізарних рецепторів ГнРГ і не менш виражене заняття зв'язуючих ділянок.

В іншому дослідженні (78) ми вводили самцям щурів протягом 4 тижнів щодня підшкірно ін'єкції цетрорелікса ацетату або агоніста ГнРГ в дозі 100 мкг на добу. Іншій групі щурів вводили одноразово внутрішньом'язово ін'єкцію 4,5 мг цетрорелікса пальмоата (депо-форма). Внутрішньовенну стимулюючу пробу з ГнРГ проводили через 4 тижні лікування. ГнРГ-стимульована секреція ЛГ через 30 хвилин була пригнічена на 90 і 96%, відповідно, у щурів, які отримували цетрорелікс щодня або депо, і тільки на 33% у щурів, які отримували агонист ГнРГ. Концентрація гіпофізарних рецпторов ГнРГ падала на 69% в групі з агоністом і на 77% і 82% в групі з Цетрорелікс щоденним і депо, відповідно. Введення депо-форми цетрорелікса призводило до 75-80% придушення рівня мРНК гипофизарного рецептора ГнРГ (табл. 3) (78). Аналіз dot blot показав 83% зниження рівня мРНК рецептора ГнРГ (рис. 2). Ці результати показують, що введення антагоніста ГнРГ Цетрорелікс викликає значне зниження рівня рецептора ГнРГ і транскрипції його гена. Інші дослідники теж продемонстрували 67% зниження рівня гіпофізарної мРНК рецептора ГнРГ у самців щурів через 8 годин після введення антагоніста ГнРГ Антіда (5). Лікування антагоністами ГнРГ, так само як і агоністами, призводило до пригнічення кількості гіпофізарних рецепторів ГнРГ, всупереч протилежним точкам зору (29).

Клінічні знахідки

Більшість клінічних даних показує, що після введення агоністів ГнРГ відбувається зниження кількості рецепторів гіпофіза (12, 20. 90, 91, 96). Деякі клінічні результати дозволяють припустити, що антагоністи ГнРГ теж можуть приводити до такого ефекту. Behre et al (6) вводили чоловікам-добровольцям 10 мг цетрорелікса щодня протягом 5 днів, а потім по 1-2 мг центрорелікса один або два рази на день в Теені 3 тижнів. Щоденне введення 10 мг цетрорелікса ефективно знижувало сироваткові рівні ЛГ, ФСГ і тестостерону, це зниження трималося протягом підтримуючої терапії у всіх групах. Виявилося, що на другому і третьому тижні рівні гормонів були нижче, ніж на самому початку. Факт того, що низькі дози антагоністів ГнРГ, нееффекітвние протягом ервой тижні, потім протягом довготривалого прийому переважна гонадотропную активність, дозволяє припустити, що антагоністи ГнРГ не тільки конкурентно зв'язуються з рецепторами, але і пригнічують їх кількість. Weinbauer et al вводили дорослим самцям мавп високі дози (1400-1600 мкг / кг) антагоніста ГнРГ протягом 8 тижнів. Тест із стимуляцією 500 мкг ГнРГ на 3 тижні викликав підвищення рівня ЛГ, а на 8 тижні був неефективний (116). Ці дослідження підтримують нашу концепцію про те, що тривале введення антагоністів ГнРГ надає подвійний ефект: конкурентне зв'язування з рецепторами ГнРГ і придушення їх кількості.

Дослідження in vitro впливу антагоністів ГнРГ на гіпофізарні рецептори ГнРГ

Відомості про механізм дії антагоністів ГнРГ на рецептори суперечливі. В одних дослідженнях заперечується тривале придушення кількості зв'язують ГнРГ рецепторів, в інших підтверджується, по-третє? підтверджується, але підкреслюється механізм? не за рахунок зменшення кількості рецепторів, а за рахунок повільного від'єднання лиганда-антагоніста.

У недавніх дослідженнях Було показано Відсутність Зміни уровня мРНК рецептора ГнРГ на тлі пульсуючого режиму Введення цетрорелікса або трівалого течение 6 годин? и Збільшення уровня мРНК на тлі трівалого Введення цетрорелікса течение 24 годин. Це свідчить про конкурентний блокуванні антагоністом ГнРГ його рецепторів і компенсаторному, за принципом зворотного зв'язку, підвищення експресії гена рецептора ГнРГ. Тривале введення цетрорелікса одночасно з пульсуючим введенням агоністу ГнРГ призводило до 50% зниження експресії гена рецептора ГнРГ (табл. 4). Ні агонист, ні антагоніст не чинили такого ефекту на рівень рецептора, коли вводилися ізольовано.

Вплив цитотоксичних аналогів ГнРГ на гіпофіз

Експериментальні дослідження показали, що цитотоксичні аналоги ГнРГ блокують зростання людських тканин злоякісних пухлин простати, молочної залози і яєчника, пересаджених мишам. Ці препарати можуть бути корисними для клінічної практики. Пошкодження цими агентами клітин гіпофіза, які секретують ЛГ, ФСГ, ТТГ, АКТГ і ГР, можуть не бути небезпечними для пацієнтів з раком, оскільки при деяких злоякісних пухлинах проводиться гіпофізектомія (96). Наші дослідження показали, що цитотоксичні аналоги ГнРГ, такі як AN-207, роблять виборчу та тимчасову дію на клітини, що продукують ЛГ, але не на інші клітини, а препарат AN-201 неселективно пошкоджує клітини, що продукують ЛГ, ГР і ТТГ (56) . Можливі пошкодження клітин, які секретують ГР і ТТГ, можна компенсувати замісною терапією (56, 103, 104). Цитотоксичний аналог ГнРГ AN-207 значно знижує рівень мРНК рецептора ГнРГ в гіпофізі оваріектомірованних щурів через 5 годин після введення, але вже через тиждень після лікування експресія гена рецептора ГнРГ вже не відрізняється від контролю (85).

Рецептори ГнРГ в пухлинних тканинах

Крім гіпофіза, агоністи і антагоністи ГнРГ можуть показувати прямий вплив на пухлинні клітини (91). Специфічні мембранні рецептори ГнРГ були виявлені в тканинах багатьох злоякісних пухлин людини і тварин (20, 96, 112). Високоафінні зв'язують ділянки для ГнРГ і експресія мРНК рецептора ГнРГ були зафіксовані в зразках людського раку простати (30, 80). Деякі дослідники відзначили присутність рецепторів ГнРГ в клітинних лініях людського раку молочної залози (16, 69, 119). Ми виявили високоафінні зв'язують ділянки для ГнРГ в більш половини зразків людського раку молочної залози (22). Також рецептори ГнРГ були виявлені в зразках людського раку яєчників і в клітинної лінії раку яєчників (19, 20, 39, 70, 110). Присутність високоаффінних мембранних рецепторів ГнРГ зафіксовано в близько 80% зразків людської карциноми ендометрія (19-21). Рецептори ГнРГ в тканини пухлин і гіпофіза подібні (48). Експресія гена рецептора ГнРГ в людських пухлинах молочної залози, ендометрія, яєчника і відповідних клітинних лініях була продемонстрована за допомогою ПЛР зі зворотною транскрипцією (19, 31, 35, 39, 48).

Прямий вплив агоністів і антагоністів ГнРГ на пухлини

Аналоги ГнРГ мають прямий вплив на злоякісні пухлини молочної залози, простати, яєчників і ендометрія за допомогою взаємодії зі специфічними рецепторами ГнРГ на пухлинних клітинах (15, 17, 19, 21, 61, 80, 91, 96, 97, 112). Спостереження про гальмування росту культури пухлинних клітин під дією аналогів ГнРГ підтверджують цю концепцію. Документовано блокування розмноження клітинних ліній раку простати, молочної залози, яєчників і ендометрія під впливом агоністів і антагоністів ГнРГ (16, 35, 61, 69, 91, 107). Ці результати припускають регуляторну роль ГнРГ-подібних пептидів в пухлинному рості. Виявлення синтезу ГнРГ-подібних пептидів або експресії мРНК ГнРГ в клітинних лініях людського раку простати, молочної залози, ендометрія і яєчників дозволяє припустити, що в регуляції росту цих пухлин включений місцево синтезується ГнРГ, а також специфічні рецептори до нього (19, 35, 40, 62, 91, 15, 17, 18). Dondi (15) and Emons (17) et al припустили, що така продукція ГнРГ пухлинними клітинами може надавати блокуючу дію, однак проліферація in vitro різних пухлинних клітин пригнічується антагоністами ГнРГ по дозозалежного принципом, а блокуючий ефект агоністів може пояснюватися зниженням кількості рецепторів. Наші недавні дослідження на клітинної лінії ES-2 раку яєчників показали, що місцево продукується ГнРГ може надавати стимулюючий ефект (2).

Вплив аналогів ГнРГ на пухлинну проліферацію і рецептори ГнРГ в різних пухлинах

Рак молочной залоза

Різні дослідження на тваринах моделях раку молочної залози продемонстрували зниження кількість рецепторів ГнРГ в пухлини паралельно з гальмуванням пухлинного росту. Szende et al (113) показали, що цетрорелікс (25 мкг \ добу) викликає значне пригнічення рівня рецепторів ГнРГ в естроген-залежної пухлини у мишей, причому через 3 тижні спостерігалося більш значне пригнічення росту, ніж при такій же дозі введеного антагоніста ГнРГ. Обидва аналога так само пригнічували рівень рецепторів ЕФР. У щурів з карциномою молочної залози цетрорелікс також викликав регресію пухлини і зменшував масу матки і яєчників, імовірно за рахунок зменшення кількості гіпофізарних рецепторів ГнРГ (82). При естроген-незалежному раку молочної залози цетрорелікс і агоніст ГнРГ гальмував пухлинний ріст і придушував кількість рецепторів ГнРГ, а також рецепторів ЕФР і ИПФР-1 в пухлині (114). У мишей з MCF-7MIII людським раком молочної залози цетрорелікс в дозі 30 мкг на добу і агоніст ГнРГ в дозі 25 мкг на добу повністю зупиняли зростання пухлини на період 6 тижнів і знижували кількість рецепторів ГнРГ в пухлини (119). Також було показано пряме антипроліферативну дію агоністів і антагоністів ГнРГ на клітинні лінії людського раку молочної залози in vitro (16, 20, 69, 96, 107). Використовуючи кДНК людського гіпофізарного рецептора ГнРГ, Kakar et al (48) продемонстрували експресію гена рецептора ГнРГ в клітинної лінії людського раку молочної залози.

Цитотоксичні аналоги ГнРГ з високою аффинностью зв'язуються з клітинами людського раку молочної залози (31) і значно знижують рівень рецепторів ГнРГ в пухлинах після введення in vivo (45). У самок мишей з естроген-незалежним мишачим раком молочної залози цитотоксичні аналоги AN-207 і AN-152 викликають придушення на 89% і 93%, відповідно, зростання пухлини (115). Специфічні високоафінні рецептори ГнРГ були виявлені в зразках пухлини мишей з контрольної групи (без лікування) і не знайшлися в основній групі, через 15-17 днів введення препарату. В інших дослідженнях при введенні цитотоксического аналога AN-207 мишам з людським раком молочної залози не було виявлено рецепторів ГнРГ в основній групі, і були виявлені вони і їх мРНК в значній кількості в контрольній групі (44). Коли мишам з негормональнозавісімим раком молочної залози вводили внутрішньовенно одноразову дозу 250 нмоль \ кг цитотоксического аналога AN-207, ріст пухлини значно пригнічувався через 3 тижні (45). Через 3 тижні після введення присутність мРНК рецептора ГнРГ було зафіксовано за допомогою ПЛР зі зворотною транскрипцією в усіх групах, а радіорецепторний аналіз продемонстрував наявність високоаффінних зв'язуючих ділянок для ГнРГ на мембранах пухлинних клітин в контрольній групі і їх відсутність в основний (табл. 5). Через 60 днів після введення AN-207 високоафінні зв'язують ділянки ГнРГ були знову виявлені (45). Наші результати показали, що високоафінні рецептори ГнРГ виникають в тканині пухлини знову через якийсь час, що вимагає повторних введень цитотоксичних аналогів ГнРГ з лікувальною метою. У минулих дослідженнях ми пов'язували AN-152, цитотоксичний аналог ГнРГ, що містить доксорубіцин, з двухфотонная флюорофором (С625) для вивчення клітинного шляху речовини в пухлини (117). Використовуючи двухфотонний лазерний скануючий мікроскоп, можна було спостерігати безпосередньо взаємодія AN-152 з ГнРГ-рецепторами клітин раку молочної залози і його рецептор-опосередкований входження в цитоплазму і ядро ​​(117).

рак ендометрія

Високоафінні рецептори ГнРГ присутні в 80% в мембранах клітин людського раку ендометрія і клітинних ракових ліній (20, 21, 111). Біоактивні і Иммунореактивность ГнРГ і експресія мРНК ГнРГ були виявлені в клітинних лініях раку ендометрія (40). Emons et al (21) відзначили, що антагоніст ГнРГ цетрорелікс і агоніст ГнРГ блокують проліферацію клітин ліній HEC-1A і Ishikawa in vitro, але інший агоніст? бусерелін? не чинив ефекту на клітини раку ендометрія. Вплив аналогів ГнРГ на рецептори ГнРГ клітин раку ендометрія поки не описано.

Епітеліальний рак яєчників

Специфічні рецептори ГнРГ були виявлені в 78% зразків человеской карциноми яєчників (20, 110) і в клітинних лініях людського раку яєчників OV-1063, EFO-21, EFO-27 (18, 120). Ці рецептори можуть опосередковувати прямий ефект аналогів ГнРГ на ріст пухлинних клітин in vitro і in vivo (20, 96). Агоніст ГнРГ може зменшувати проліферацію EFO-21 і EFO-27 in vitro (18). Дослідження in vitro також показали, що цетрорелікс зв'язується з рецепторами ГнРГ в лініях OV-1063 і EFO-21 і може блокувати їх проліферацію (рис. 3). Експресія мРНК ГнРГ і рецептора ГнРГ в клітинних лініях свідчить про можливе залучення місцевого синтезу ГнРГ в регцляцію проліферації раку яєчників (19). Наша недавня робота показала, що клітини лінії ES-2 людського раку яєчників секретують ГнРГ, і їх зростання може блокуватися Цетрорелікс (2), однак низькі дози агоніста ГнРГ? 10 нг \ мл? можуть стимулювати ріст клітин через 48 годин (рис. 4). Можливо, роль аутокринного ГнРГ може бути стимулюючою, а не блокує, що підтверджується також тим, що додавання антитіл до ГнРГ в розведенні 1: 10000? 1: 50000 блокує проліферацію ES-2 клітин (рис.5) (2). Блокування клітинної проліферації було час- і дозозалежним. Це блокування може пояснюватися тим, що продукція ГнРГ клітинами ES-2 проявляється як стимулюючий ростовий фактор. Дослідження in vivo показали, що цетрорелікс блокує зростання людських клітин епітеліального раку яєчників OV-1063 і ES-2, імплантованих мишам, сильніше, ніж агонист ГнРГ (рис. 6). Цетрорелікс зупиняє ріст пухлини і знижує кількість ИПФР-1, ЕФР? Рецепторів і мРНК до них в пухлини (108, 120). Вплив цетрорелікса на рецептори ИПФР-1 і ЕФР може бути пов'язано з блокуванням зростання пухлини.

Наше недавнє дослідження продемонструвало транслокацию рецепторів ГнРГ в ядро ​​клітин людського епітеліального раку яєчників лінії OV-1063 після лікування Цетрорелікс, кількість рецепторів ГнРГ на мембрані клітин до 14 дня значно знизилося, а в ядрах - підвищилося (Рис. 7) (32). Агоніст ГнРГ теж надавав подібну дію, але менш виражене, ніж цетрорелікс. Наші результати показали, що придушення концентрації рецепторів ГнРГ в мембрані клітин і їх підвищення в ядрах після терапії антагоністами або агоністами ГнРГ може бути пов'язано з интернализацией і транслокацией рецепторів.

Оцінювалося також вплив цитотоксичних аналогів ГнРГ на зростання раку яєчників і на рецептори ГнРГ (70, 71). У першому дослідженні ми показали, що одноразове введення цитотоксического аналога AN-152 в дозі 20,6 мкмоль \ кг значно блокує зростання ГнРГ-рецептор-позитивних пухлин яєчника OV-1063 у мишей на 4 тижні, як мінімум (70). Специфічні зв'язують ділянки для ГнРГ були виявлені в OV-1063 пухлинах у контрольних тварин, але в групі отримували AN-152 рецептори не визначались. AN-152 не блокував зростання ГнРГ-рецептор-негативних людських карцином яєчника UCI-107, що підтверджує необхідність присутності рецепторів ГнРГ для цілеспрямованої цитотоксичної терапії (70). В іншому дослідженні ми продемонстрували, що зростання OV-1063-раку яєчника може бути пригнічений як мінімум на 3-4 тижні введенням 150-250 нмоль \ кг цитотоксического аналога ГнРГ AN-207 (71). Специфічні зв'язують ділянки для ГнРГ були виявлені в пухлинах контрольних тварин, але не в основний, що одержувала лікування. Лікування цитотоксическим аналогом ГнРГ AN-207 також викликало значне зниження експресії мРНК ГнРГ-рецепторів. Спрямована хіміотерапія, заснована на таких препаратах як AN-207 і AN-152, може покращувати якість ведення хворих з раком яєчника.

Агоністи ГнРГ мають важливе клінічне застосування в гінекології і онкології. Потенційні антагоністи ГнРГ, такі як цетрорелікс, також доступні для клінічного використання. Крім того, розроблені цитотоксические аналоги ГнРГ, які взаємодіють з ГнРГ-рецепторами пухлин. Дія ГнРГ і його аналогів опосередковується через високоафінні рецептори ГнРГ, виявлені в гонадотрофах гіпофіза і багатьох пухлинах. Механізм дії аналогів ГнРГ показаний на рис. 8. Тривала стимуляція гіпофіза агоністами ГнРГ блокує гіпофізарно-яєчникової вісь, пригнічуючи кількість рецепторів ГнРГ в гіпофізі. Це спостереження лежить в основі клінічного застосування агоністів ГнРГ в гінекології і онкології. Введення агоністів ГнРГ мишам і вівцям також викликає зниження рівнів мРНК гіпофізарних рецепторів ГнРГ. У культурі клітин гіпофіза високі дози агоністів можуть пригнічувати кількість рецепторів ГнРГ і знижувати рівень рецепторной мРНК. Антагоністи ГнРГ викликають конкурентну блокаду рецепторів ГнРГ і негайне блокування вивільнення гонадотропінів і статевих гормонів, що скорочує час настання терапевтичного ефекту в порівнянні з агоністами. Антагоністи ГнРГ, такі як цетрорелікс, вже застосовуються в онкології і гінекології і демонструють ряд предімуществ перед агоністами. Наші дослідження показали, що введення цетрорелікса щурам викликає значне пригнічення кількості гіпофізарних мембранних рецепторів ГнРГ, причому не тільки шляхом конкурентного блокування, але і шляхом зниження їх синтезу, що підтверджується зниженням рівня рецепторной мРНК in vivo і in vitro. Деякі клінічні результати підтверджують, що антагоністи ГнРГ можуть пригнічувати функцію гіпофіза, це необхідно враховувати при плануванні лікування. Прямий блокуючий ефект високих доз агоністів і антагоністів ГнРГ на рак передміхурової, молочної залози, яєчників і ендометрія був продемонстрований in vitro. Присутність високоаффінних ділянок зв'язування для ГнРГ і експресія мРНК ГнРГ-рецепторів також зафіксована в клітинах цих пухлин. Антагоніст ГнРГ цетрорелікс блокує зростання людських пухлинних ліній, пересаджених мишам, краще, ніж агонист. У дослідах in vitro з агоністом і антагоністом ГнРГ відбулося зниження рівня мРНК рецепторів ГнРГ, ЕФР і ИПФР-1 в цих пухлинах, що може мати клінічне значення. Зниження рівня мРНК до ИПФР-2 в деяких пухлинах під дією цетрорелікса теж може мати відношення до пригнічення росту пухлини. Лікування мишей з людською пухлиною OV-1063 антагоністом ГнРГ Цетрорелікс і агоністом викликало зниження кількості рецепторів ГнРГ на мембранах клітин пухлини, що супроводжується підвищенням кількості цих же рецепторів в ядрах клітин, що може пояснюватися интернализацией і транслокацией рецепторів. Зростання раків передміхурової залози, молочної та яєчників, що експресують рецептори ГнРГ, різко пригнічується у експериментальних тварин прямими цитотоксическими аналогами ГнРГ, такими як AN-207. Рівень мРНК рецепторів ГнРГ і самих рецепторів в пухлини різко знижується після курсу лікування, однак в подальшому відновлюється, що вимагає повторних курсів введення цитотоксичних аналогів.

Вплив агоністів та антагоністів ГнРГ, а також цитотоксичних аналогів ГнРГ на гіпофіз, рак передміхурової, молочної залози, яєчників і ендометрія. Деякі механізми дії аналогів все ще приблизною. Багато механізмів в гіпофізі і пухлинах здаються однаковими. Однак класичний механізм сигнальної трансдукції (11, 112) в пухлинах дещо відрізняється від такого в гіпофізі (17, 19). Цитотоксичні аналоги ГнРГ викликають пошкодження пухлинних клітин і таким чином руйнівну дію на рецептори.

Див. Також інші переклади , наукові статті, огляди , дисертації и Корисні посилання в розділі "Лікарям"