67 гостей
НОВІ ПІДХОДИ ДО КЛАСИФІКАЦІЇ ЗУБЧАТИХ УТВОРЕНЬ товстої кишки
1 Харлова О.А. 1 Олейникова Н.А. 1 Мальков П.Г. 1 Данилова Н.В. 1
1 МГУ імені М.В. Ломоносова
Зубчасті освіти товстої кишки в сучасній класифікації розділені на три основні категорії: гіперпластичний поліп (НР), зубчаста аденома / поліп на широкій основі (SSA / P) і традиційна зубчаста аденома (TSA). Незважаючи на існуючі складнощі, патології рекомендується докладати всіх можливих зусиль для виявлення SSA / P, так як їх потенціал малігнізації вище, ніж у НР. Дана робота присвячена порівнянню потенціалу злоякісності HP і SSA / P на основі імуногістохімічного профілю (cdx2, beta-catenin, p53, ki67, claudin-1, -3, -4, CD44, Musashi-1). Отримані нами результати вказують на відсутність иммуногистохимических відмінностей між HP і SSA. Рівень експресії більшості вивчених маркерів вказує на менший потенціал злоякісності HP і SSA / P в порівнянні з TSA. Порівняно високий рівень аномальної експресії CDX2 підтверджує його значну роль в малігнізації HP і SSA / P альтернативним шляхом. TSA принципово відрізняється від HP і SSA / P імунофенотипові, що може свідчити про більший потенціал злоякісності або про різні шляхи канцерогенезу цих типів поліпів, незважаючи на об'єднання в загальну групу «зубчасті освіти». В роботі показано відсутність статистичної різниці між НР і SSA / P і принципова відмінність від них TSA, що може бути підставою для модернізації класифікації поліпів товстої кишки.
імуногістохімія
зубчасті освіти
поліпи товстої кишки
1. Urbanski SJ, Kossakowska AE, Marcon N., Bruce WR Mixed hyperplastic adenomatous polyps - an underdiagnosed entity. Report of a case of adenocarcinoma arising within a mixed hyperplastic adenomatous polyp // Am J. Surg Pathol. - 1984. - T. 8, № 7. - C. 551-6.
2. Torlakovic E., Skovlund E., Snover DC et al. Morphologic reappraisal of serrated colorectal polyps // Am J. Surg Pathol. - 2003. - T. 27, № 1. - C. 65-81.
3. Goldstein NS, Bhanot P., Odish E., Hunter S. Hyperplastic-like colon polyps that preceded microsatellite-unstable adenocarcinomas // Am J. Clin. Pathol. - 2003. - T. 119, № 6. - C. 778-96.
4. Snover DAD, Burt RW, Odze RD et al. Serrated polyps of the colon and rectum and serrated ( "hyperplastic") polyposis // WHO Classification of Tumours Pathology and genetics Tumours of the digestive system / Bozman FTCF, Hruban RH et al. - Lyon: IARC Press, 2010. - C. 160-165.
5. Kawasaki K., Kurahara K., Yanai S. et al. Colonoscopic features and malignant potential of sessile serrated adenomas: comparison with other serrated lesions and conventional adenomas // Colorectal Dis. - 2016. - T. 18, № 8. - C. 795-802.
6. Caruso M., Fung KY, Moore J. et al. Claudin-1 Expression Is Elevated in Colorectal Cancer Precursor Lesions Harboring the BRAF V600E Mutation // Transl Oncol. - 2014. - T. 7, № 4. - C. 456-63.
7. Kuang RG, Kuang Y., Luo QF et al. Expression and significance of Musashi-1 in gastric cancer and precancerous lesions // World J. Gastroenterol. - 2013. - T. 19, № 39. - C. 6637-44.
8. Dallas MR, Liu G., Chen WC et al. Divergent roles of CD44 and carcinoembryonic antigen in colon cancer metastasis // Faseb j. - 2012. - T. 26, № 6. - C. 2648-56.
9. Dalerba P., Sahoo D., Paik S. et al. CDX2 as a Prognostic Biomarker in Stage II and Stage III Colon Cancer // N. Engl. J. Med. - 2016. - T. 374, № 3. - C. 211-22.
10. Li XL, Zhou J., Chen ZR, Chng WJ P53 mutations in colorectal cancer - molecular pathogenesis and pharmacological reactivation // World J. Gastroenterol. - 2015. - T. 21, № 1. - C. 84-93.
11. Rex DK, Ahnen DJ, Baron JA et al. Serrated lesions of the colorectum: review and recommendations from an expert panel // Am J. Gastroenterol. - 2012. - T. 107, № 9. - C. 1315-29; quiz 1314, 1330.
12. Sheehan GM, Kallakury BV, Sheehan CE et al. Loss of claudins-1 and -7 and expression of claudins-3 and -4 correlate with prognostic variables in prostatic adenocarcinomas // Hum Pathol. - 2007. - T. 38, № 4. - C. 564-9.
13. Moussata D., Boschetti G., Chauvenet M. et al. Endoscopic and histologic characteristics of serrated lesions // World J. Gastroenterol. - 2015. - T. 21, № 10. - C. 2896-904.
14. Szylberg L., Janiczek M., Popiel A., Marszalek A. Serrated polyps and their alternative pathway to the colorectal cancer: a systematic review // Gastroenterol Res. Pract. - 2015. - T. 2015. - C. 573 814.
15. Bordacahar B., Barret M., Terris B. et al. Sessile serrated adenoma: from identification to resection // Dig. Liver Dis. - 2015. - T. 47, № 2. - C. 95-102.
До недавнього часу більшість поліпів товстої кишки ставилися до однієї з двох груп утворень: гіперпластичні або диспластичні (аденоми тубулярні, тубуло-ворсинчасті, ворсинчасті). У 1984 році Urbanski SJ зі співавторами [1] описали поліп зі змішаною морфологією: зубчаста архітектура крипт, як в гиперпластическом поліпі, в поєднанні з дисплазією, як аденомі. У 2003 році Torlakovic EE зі співавторами [2] переглянули морфологію гіперпластичних поліпів і виділили групу утворень, характерною особливістю якої було виражене розширення базальних відділів і горизонтальний зростання крипт уздовж м'язової пластинки слизової оболонки ( «зубчаста аденома / поліп на широкій основі»). У 2005 році Goldstein NS зі співавторами [3] описує ряд випадків раку товстої кишки, попередниками якого були освіти, подібні за будовою з гіперпластичними поліпами і не мали ознак дисплазії епітелію, що послужило включенням зубчастих утворень в класифікацію ВООЗ в групу передпухлинних поразок товстої кишки в 2010 році і активно шукали маркерів, що відображають їх потенціал злоякісності.
Зубчасті освіти товстої кишки в сучасній класифікації [4] розділені на три основні категорії: гіперпластичний поліп (НР), зубчаста аденома / поліп на широкій основі (SSA / P) і традиційна зубчаста аденома (TSA). В цілому тип зубчастого освіти визначається його цитологическими і архітектурними особливостями. Однією з основних проблем в диференціальної діагностики зубчастих утворень товстої кишки є диференційний діагноз між НР і SSA / P. Незважаючи на існуючі складнощі, патології рекомендується докладати всіх можливих зусиль для виявлення SSA / P, так як їх потенціал малігнізації вище, ніж у НР, і в ряді досліджень схожий з потенціалом малігнізації класичних аденом [5].
Сучасна гіпотеза про різниці потенціалу злоякісності і різній частоті малігнізації «зубчастих» утворень спонукає до пошуку додаткових критеріїв відмінності різних морфологічних типів поліпів один від одного. Триває активний пошук прогностично значущих факторів - в літературі вже описані імуногістохімічні профілі експресії маркерів білків щільних контактів, молекул адгезії, маркерів пухлинних стовбурових клітин, маркерів проліферативної активності та інших [6].
Клаудина - сімейство трансмембранних білків, що відносяться до білків щільних контактів. У щільних контактах злоякісних клітин часто спостерігаються структурні і функціональні аномалії, які проявляються в зміні рівня експресії різних типів Клаудина.
Як джерело колоректального раку обговорюються cancer stem cells (CSC), які здатні до самопідтримки і мультіпотентной диференціювання і можуть утворюватися з мутантних стовбурових клітин або шляхом дедіфференціровкі епітеліальних клітин крипти. Маркер Musashi-1 (Msi-1) розглядається деякими авторами як маркер CSC в раку товстої кишки і шлунку [7]. Білок CD44, який є молекулою адгезії, також розглядається в якості маркера CSC. Зміна рівня CD44 асоційоване з поганим прогнозом, збільшенням кількості метастазів у пацієнтів з колоректальний рак [8]. Можливо, зміна рівня або характеру реакції цих маркерів може бути виявлено і в зубчастих утвореннях товстої кишки, що володіють великим потенціалом злоякісності.
Бета-катенин - цитоплазматичний білок, ядерне накопичення якого внаслідок інактивуючої мутації в APC або мутації в бета-Катенін призводить до активації Wnt-сигнального шляху і пухлинної трансформації товстої кишки.
CDX2 - ядерний транскріптаціонний фактор, який є однією з «мішеней» бета-Катенін, основною функцією якого є контроль диференціювання кишкового епітелію. Зниження експресії CDX2 в пухлини асоційоване з більш агресивними морфологічними характеристиками і гіршим прогнозом [9]. При дослідженні раку товстої кишки була виявлена асоціація між зниженням експресії CDX2 в пухлини і наявністю BRAF-мутації (p <0,0001), CIMP-high статусу (p = 0,0051) і MMR-deficiency (p <0,0001), на підставі чого можна припустити, що втрата експресії CDX2 грає певну роль в зубчастому шляху канцерогенезу.
P53 - транскрипційні фактор, що індукує зупинку клітинного циклу з подальшим апоптозом за допомогою клітинного стресу. P53 регулює безліч генів, що регулюють каскад безлічі сигнальних процесів. Дисрегуляція гена пухлинного супрессора р53 - одне з найбільш часто зустрічаються подій при трансформації колоректального раку, що дозволяє використовувати рівень експресії р53 в якості маркера потенціалу малігнізації [10].
Дана робота присвячена порівняльній оцінці ряду морфологічних і імуногістохімічних характеристик HP і SSA / P для обгрунтування нових підходів до класифікації.
Матеріали та методи. В ході роботи методом суцільної вибірки було відібрано матеріал 474 біопсій поліповідних утворень товстої кишки, ендоскопічних мукозальних резекцій і ендоскопічної поліпектомія: 315 HP і 159 SSA / P. Злоякісні новоутворення товстої кишки, а також освіти з фокусами дисплазії тяжкого ступеня були виключені з дослідження. Матеріал доставлявся в 10% -ному розчині формаліну, забуференном при pH 7,4-7,6. Поліпи після поліпектомія розрізали за найбільшим розміром таким чином, щоб в зріз потрапила вся товща слизової оболонки, включаючи м'язову пластинку. Весь матеріал піддавався стандартної гістологічної проводці в апараті Leica ASP300S (Germany), заливці в парафін, після чого виготовлялися зрізи товщиною 4 мкм. Скло, пофарбовані гематоксиліном і еозином, вивчалися за допомогою світлового мікроскопа Leica DM4000B / DFC495 (Germany).
В якості критеріїв HP на підставі рекомендацій ВООЗ [4] і оновлених рекомендацій 2012 года [11] були прийняті:
- наявність зубчастості цитоплазматического типу;
- відсутність розширення базальних відділів крипт;
- відсутність горизонтального зростання базальних відділів крипт уздовж м'язової пластинки слизової оболонки;
- відсутність вогнищ дисплазії;
- відсутність вогнищ еозинофільних змін епітелію.
В якості критеріїв SSA / P на підставі рекомендацій ВООЗ [4] і оновлених рекомендацій 2012 года [11] були прийняті:
- наявність зубчастості цитоплазматического типу;
- наявність одного або більше з таких критеріїв:
· Достовірне розширення базальних відділів однієї або більше крипт;
· Горизонтальний зростання базальних відділів однієї або більше крипт уздовж м'язової пластинки слизової оболонки;
· Осередкові еозинофільні зміни епітелію;
· Наявність вогнищ дисплазії.
Статистична обробка даних проводилася з використанням програми PASW Statistics 22. Рівень значущості (p) приймали рівним 0,05 у всіх вищеописаних порівняннях.
Для імуногістохімічних визначень були відібрані 43 HP і 49 SSA / P. Використовували моноклональні антитіла до маркера проліферативної активності Ki-67, транскрипційним факторів (бета-Катенін і cdx-2), білків щільних контактів (claudin-1; claudin-3; claudin-4) і маркерами стовбурових пухлинних клітин (musashi-1 і CD44 ) (таблиця). В якості групи порівняння були відібрані 32 TSA, оскільки за сучасною класифікацією вони включені в групу зубчастих утворень.
Характеристика використаних антитіл
П / П
ГРУПА
БІЛОК
КЛОН АНТИТІЛ
РОЗВЕДЕННЯ
ВИРОБНИК
1
Ki67
MIB1
RTU
Dako (USA)
2
транскрипційні фактори
Beta-catenin
β-Catenin-1
RTU
Dako (USA)
3
Cdx-2
DAK-CDX2
RTU
Dako (USA)
4
Білки щільних контактів
Claudin-1
поліклональні
RTU
Thermo (UK)
5
Claudin-3
поліклональні
RTU
Thermo (UK)
6
Claudin-4
поліклональні
RTU
Thermo (UK)
7
Маркери пухлинних стовбурових клітин
Musashi-1
69-Q
1: 100
Santa Cruz (USA)
8
CD44
DF 1485
1:25
Dako (USA)
Оцінку Ki-67 виробляли за загальноприйнятою схемою шляхом підрахунку кількості забарвлених ядер на 100 ядер препарату, усереднений результат виражався у відсотках. Окремо оцінювався розподіл реакції Ki67 по відділах крипти, розділеним на третини (нижня, середня і верхня).
При оцінці експресії CDX2 в кожному випадку оцінювалася інтенсивність фарбування (слабка, помірна або виражена) і відсоток забарвлених ядер. Фарбування 90% і більше ядер було прийнято за нормальний рівень експресії. Під інтенсивністю реакції розуміється яскравість. У всіх доступних оцінці фрагментах интактной слизової оболонки, що прилягають до досліджуваних утворень, відзначено виражене (яскраве) ядерне фарбування 100% клітин.
Для маркера Beta-catenin оцінювалася наявність і інтенсивність (яскравість) ядерної експресії, частка і розподіл забарвлених клітин.
Реакція Клаудина оцінювалася за формулою «інтенсивність (0-3) x кількість прореагировавших клітин (0-3)» і розцінювалася як негативна, слабка (1-3), помірна (4-6) і виражена (9). Також оцінювалася локалізація маркера: мембранна, цитоплазматическая, ядерна. Інтенсивність і розподіл оцінювалися напівкількісним методом: інтенсивність градіровать за шкалою 1 - слабка; 2 - помірна; 3 - виражена. Розподіл реакції в пухлинних клітинах розцінювалося як 1 - фокальное (<10% клітин); 2 - регіональне (11-50% клітин); і 3 - дифузне (> 50% клітин). Інтенсивність і розподіл, виражені в балах, перемножуються, даючи підсумковий бал [12].
Інтенсивність реакції Msi-1 окремо оцінювалася в цитоплазмі (0; "+", "++", "+++") і в ядрі (0; "+", "++", "+++"; "+ +++ ";" +++++ ").
Було зроблене роздільна напівкількісна оцінка мембранної і цитоплазматичної реакції CD44 з використанням наступної шкали: "-" - негативна, "+" - слабка, "++" - помірна, "+++" - виражена. Також звертали увагу на розподіл мітки по відділах крипти, розділеним на третини (нижня, середня і верхня).
Нами була оцінена інтенсивність p53 (слабка, помірна або виражена), розподіл маркера (нижня частина крипти, поверхнева частина крипти або крипта цілком) і розподіл позитивних клітин.
результати
Маркер проліферативної активності: Ki67
У HP індекс проліферативної активності варіював від 3% до 45% (середнє значення 24,1%), і зазначалося два типи розподілу мітки:
· Реакція в базальних відділах поліпа (нижньої третини крипти) - спостерігалася в 69,2%;
· Реакція в базальних відділах з поширенням на середню третину поліпа (рис. 1a) - спостерігалася в 30,8%.
Мал. 1. Ядерна реакція Ki67 в зубчастих утвореннях товстої кишки:
а - гіперпластичний поліп товстої кишки, реакція Ki67 в базальних відділах з поширенням на середню третину, х100; b - зубчаста аденома на широкій основі, ядерна реакція Ki67 в базальних відділах крипт з розширенням уздовж м'язової пластинки, х100; з - мембранна реакція CD44 в криптах з «зубчастим просвітом», х400;
d - мембранна реакція CD44 в зубчастої аденомі на широкій основі в базальних відділах і середньої третини крипти; у верхній третині крипти реакція відсутня, х200
У SSA / P індекс проліферативної активності варіював від 10% до 40% (середнє значення - 22,1%). Відзначався тільки один варіант розподілу мітки: в базальних відділах поліпа, тобто в нижній третині крипти (100%), без поширення на середню третину (рис. 1b).
За даними літератури, SSA / P характеризується зміщенням проліферативної зони з «звичних» базальних відділів крипт, формуванням ектопічного вогнища проліферації, що обумовлює формування L-, T-образних крипт, а «зубчатість» в HP і SSA формується за рахунок того, що зони дозрівання розташовуються по обидва боки від проліферативної зони [13]. У нашому дослідженні виявити зміщення зони проліферації в гіперпластичних поліпах і зубчастих аденомах на широкій основі не вдалося ні за експресією Ki67, ні за рівнем формування зубчастого просвіту.
Принципово іншим був характер реакції Ki67 в TSA. Рівень Ki67 в TSA виявився вищим, ніж в HP і SSA: середнє значення склало 39,7%, іншим було і розподіл мітки по висоті крипти:
· Рівномірно дифузно по всьому поліпу (76,5%);
· Переважно в поверхневих відділах аденоми - (23,5%). Поверхневі відділи аденоми в обов'язковому порядку включали верхню третину крипти.
Маркери пухлинних стовбурових клітин: CD44 і Musashi-1
У всіх спостереженнях в HP і SSA реакція CD44 носила мембранний характер, що є типовою локалізацією для даного маркера (рис. 1c), і виявлялася в базальних відділах крипт (нижня третина) (рис. 1d). У трохи більше ніж в половині випадків гіперпластичних поліпів (53,9%) і лише в 11,4% SSA реакція також виявлялася в середніх відділах. Інтенсивність реакції зменшувалася у напрямку до просвіту кишки, але останнього не досягала. За досліджуваним маркерами Ki67 і CD44, а також маркерами, описаним в попередніх дослідженнях, виявити статистично значущих відмінностей між HP і SSA не вдалося (p> 0,05). Ці результати не здаються нам такими, що суперечать сучасній класифікації, оскільки джерело SSA не визначений. За деякими даними, SSA часто розвивається з мікровезікулярного HP [14], але існує думка, що SSA розвивається de novo. Можливо, дані розбіжності пов'язані з суперечливими критеріями визначення SSA. Так, відповідно до рекомендацій American Gastroenterology Association, наявність однієї крипти з розширенням базальних відділів досить для верифікації SSA, а за класифікацією ВООЗ необхідно мінімум три (або дві сусідні крипти) для підтвердження діагнозу [15]. Залежно від критеріїв варіює і загальна чисельність SSA, і їх походження. Експресія CD44 характеризувалася такими самими закономірностями розподілу по поліпів, як і Ki67, хоча CD44 не відображає проліферативну активність. Така коекспрессія може бути пояснена участю молекул CD44 в передачі специфічних сигналів через компоненти цитоскелету, що стимулює збільшення мітотичної активності клітин.
У всіх TSA реакція CD44 спостерігалася у верхній і середній третинах. У ряді випадків (64,7%) реакція також виявлялася в нижній третині. Примітно, що навіть якщо реакція спостерігалася дифузно по всій аденомі (тобто і в верхній, і в середній, і в нижній третинах крипти), в 52,9% відзначалася наявність градієнта: в апікальних відділах крипт, звернених до просвіту, реакція була значно более выражена, чем в базальных, что свидетельствовало о распространении реакции «сверху вниз» по аденоме, а не наоборот, в отличие от HP и SSA.
Маркер Msi-1 у всіх спостереженнях HP і SSA / P мав ядерну локалізацію. Статистичної різниці між групами виявити не вдалося. У групі TSA в 59,0% реакція виявилася змішаною (цитоплазматична + ядерна), в інших 35,0% випадків - ядерна. Статистично розподіл реакції і рівень Msi-1 був вище в TSA в порівнянні з HP і SSA / P (p <0,05).
Маркери активації Wnt-шляху: Beta-catenin і CDX2
У групах HP і SSA / P ядерна експресія Beta-catenin була виявлено ні в одному випадку (статистичної різниці між групами виявлено не було). TSA статистично достовірно відрізнялася від HP і SSA / P (p <0,05): в 15,5% випадків спостерігалася ядерна реакція бета-Катенін, з них в 7,7% зазначалося наявність дрібних груп забарвлених ядер тільки у верхній частині крипт, в 7,7% - дифузне фарбування 50% ядер.
У більшості випадків TSA була виявлена дифузна помірна або виражена ядерна експресія CDX2 (рис. 2b), причому вираженість реакції у всіх випадках була нижче, ніж в прилеглих фрагментах интактной слизової оболонки. Серед HP в 14,3% відзначалося слабке ядерне фарбування в базальних відділах крипт при більш вираженому фарбуванні в поверхневих відділах; в 14,3% - мозаїчність фарбування з формуванням вогнищ зі слабкою інтенсивністю реакції. Серед SSA / Р в 11,5% відзначалося слабке ядерне фарбування в поверхневих відділах крипт при більш вираженому фарбуванні в базальних відділах; в 11,5% - мозаїчність фарбування з формуванням вогнищ зі слабкою інтенсивністю реакції, в 3,8% - дифузна слабка реакція в 30% ядер (рис. 2а).
Отримані нами результати оцінки експресії Beta-catenin свідчать про те, що частина TSA, поряд з тубулярна і тубуло-ворсинчатими аденомами, мають аномальним ядерним накопиченням Beta-catenin, що свідчить про можливість малігнізації через Wnt-сигнальний шлях. Відсутність ядерної експресії серед ДП і SSA / Р, на перший погляд, виключає можливість малігнізації по «класичному» шляху канцерогенезу. Однак виявлені аномалії експресії білка CDX2 в 28,6% ДП і 26,8% SSA / Р можуть свідчити на користь залучення альтернативних механізмів «запуску» класичного шляху канцерогенезу, так як CDX2 є однією з «мішеней» Beta-catenin. У той же час більш слабка експресія CDX2 в частині ДП і SSA / Р може свідчити про менший диференційованості епітелію в зубчастих утвореннях в порівнянні з TSA, що може розглядатися як один з можливих механізмів малігнизації зубчастих утворень.
Мал. 2: a - SSA / P: відсутність ядерної експресії бета-Катенін, x400; b - TSA: дифузна ядерна експресія бета-Катенін помірної інтенсивності (яскравості), x400;
c - HP: порушена експресія p53; позитивно забарвлені клітини в нижній частині крипти, x200; d - TSA: порушена експресія p53; позитивно забарвлені клітини по всій висоті крипти, x100
Незважаючи на відсутність статистично достовірних відмінностей ні в частоті виявлення порушень експресії CDX2, ні в її характері між НР і SSA / P відзначається тенденція до більш виражених порушень експресії CDX2 в SSA / P. НР і SSA / P, ймовірно, являють собою етапи розвитку одного освіти, в якому відбувається поступове накопичення «поломок» генетичного апарату. Одним з біологічних маркерів цього процесу, ймовірно, є зниження і подальша втрата експресії CDX2. Залучений чи CDX2 безпосередньо в процес злоякісної трансформації НР і SSA / P або є лише маркером відбуваються молекулярних змін, а також на якому етапі відбувається порушення експресії CDX2, в даний час залишається не ясним.
Маркер апоптозу: p53
Експресія p53 була виявлена в 7,1% HP, 13,3% SSA / P і 6,7% TSA. Слабка експресія p53 вважалася при експресії слабкої інтенсивності або помірною або вираженою інтенсивності в менш ніж 5% клітин. Експресія слабкої інтенсивності була виявлена в 50,0% HP, 36,7% SSA / P і 13,3% TSA. Експресія помірною або вираженою інтенсивності менш ніж в 5% клітин була виявлена в 14,3% HP, 20,0% SSA / P і 6,7% TSA.
Порушенням експресії p53 вважалася реакція помірною або вираженою інтенсивності в 5% і більше клітин. Така була виявлена в 28,6% HP, 30,0% SSA / P і 73,3% TSA. У всіх HP і SSA / P p53 позитивно забарвлені клітини (аберрантним експресія) були розташовані в нижній частині крипт (рис. 2 с); в TSA - навпаки, в поверхневій частині або вздовж всієї крипти (рис. 2d). Наявність поверхнево розташованої експресії p53 було виявлено в 63,6% TSA з аберрантной експресією. Дифузне розподіл - в 36.4% TSA з аберрантной експресією. Подібне розподіл реакції було виявлено між HP і SSA / P (p <0,05). Середня кількість p53-позитивних клітин (помірної або вираженої інтенсивності) склало 6,6% серед HP, 6,0% серед SSA / P і 25,4% серед TSAs. Статистично значущої різниці за кількістю p53 позитивних клітин між HP і SSA / P виявлено не було (p> 0,05). TSA значно відрізнялися від двох інших груп.
Маркери білків щільних контактів: Клаудина-1; -3; -4
Рівні Клаудина-1 і Клаудина-3 в HP (середнє значення 2,38 і 2,38 відповідно) і в SSA / P (середнє значення 3,63 і 3,21 відповідно) виявилися приблизно однаковими. Була виявлена тільки мембранна локалізація маркера, цитоплазматическая реакція маркерів не зустрічалася. Реакція Клаудина-4 носила переважно мембранний характер. У 15,4% HP і 26,3% крім мембранної спостерігалася також цитоплазматическая реакція. Також в 26,3% на тлі мембранної і цитоплазматичної реакцій була виявлена парадоксальна ядерна реакція з характерною мозаїчністю реакції. У TSA рівень всіх Клаудина статистично був вище (p <0,05).
Звертає на себе увагу принципова відмінність TSA від HP і SSA по всіх досліджуваних маркерів (p <0,01). Незважаючи на те що в сучасній офіційній класифікації TSA віднесена до «зубчастим» поліпів, слід пам'ятати, що початково ця група була виділена Longacre TA і Fenoglio-Preiser CM (1990) з одночасного наявності в них ознак і традиційних аденом (AT і ATV), і гіперпластичних поліпів (HP). Крім того, основний класифікаційний ознака, на підставі якого виділена група «зубчастих» поліпів - так звана зубчатість просвіту крипт - але характер «зубчастості» просвіту крипт в TSA, з одного боку, і в HP і SSA - з іншого боку, принципово різний. Так, HP і SSA характеризуються «зубчасті» цитоплазматического типу, формування якої пов'язано з вибухне цитоплазми клітин в просвіт крипти у вигляді зубців (просвіт поздовжньо орієнтованих крипт пилкоподібний, поперечно орієнтованих - зірчастий). «Зубчасті» просвіту крипт в TSA обумовлена патологічним розгалуженням крипт з формуванням так званих ектопічних крипт, розташованих перпендикулярно основної осі предсуществующей крипти, формує особливий тип гістоархітектонікі, відмінною від нормальної будови слизової оболонки.
Висновок. Отримані нами результати вказують на те, що иммуногистохимический профіль (оцінений за білками щільних контактів - Клаудина-1, -3, -4, транскрипційним факторів основного Wnt-шляху канцерогенезу - beta-catenin, cdx2, p53, пухлинних стовбурових клітин - CD44, Msi -1 і маркера проліферативної активності Ki67) не відрізняється між зубчастими утвореннями з цитоплазматичними типом зубчастості. Безперервність і нерівномірність зміни морфологічних характеристик в ряду НР - SSA / P ускладнює патологоанатомічну діагностику і критерії виділення кожного підтипу окремо. TSA принципово відрізняється від HP і SSA / P імунофенотипові, що також може свідчити про різні шляхи канцерогенезу цих типів поліпів, незважаючи на об'єднання в загальну групу «зубчасті освіти». Таким чином, в роботі показано відсутність статистичної різниці між НР і SSA / P і принципова відмінність від них TSA, що може бути підставою для модернізації класифікації поліпів товстої кишки.
Дослідження виконано за фінансової підтримки гранту РФФД в рамках наукового проекту № 16-34-00179 мол_а.
бібліографічна ПОСИЛАННЯ
Харлова О.А., Олейникова Н.А., Мальков П.Г., Данилова Н.В. НОВІ ПІДХОДИ ДО КЛАСИФІКАЦІЇ ЗУБЧАТИХ УТВОРЕНЬ товстої кишки // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2018. - № 2 .;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=27471 (дата звернення: 01.06.2019).
Пропонуємо вашій увазі журнали, что видають у видавництві «Академія природознавства»
(Високий імпакт-фактор РИНЦ, тематика журналів охоплює всі наукові напрямки)
Ru/ru/article/view?
