Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles

Assay металевої пластинки масиву на основі аналізу Гіполіпідемічні ефекти наркотиків на формування частинок холестерину:

Для оцінки ефекту статинів в модуляції морфологією частинок холестерину, флуоресцентний мічених холестерину агрегатів індивідуально інкубували з Ловастатін, симвастатину, аторвастатин, Розувастатин і флувастатин в буфері. Всі ці зразки були придбані за допомогою тепловізійних проточної цитометрії для захоплення зображень холестерину частинок для аналізу морфології як показано на малюнку 1 і на малюнку 2. Цікаво, що аналіз наркотиків вплив на формування частинок холестерину в буфері вказав, що Ловастатін, симвастатину і аторвастатину викликати утворення населення гетерогенних частинок холестерину, відображення різних розмірів і форм, На малюнку 3a -c. І навпаки холестерин частки формується при наявності rosuvastatin, флувастатин, і негативний контроль (без препарату) були неоднорідні за формою і морфології, як показано на малюнку 3d -f. Крім того було відзначено, що Ловастатін, симвастатину і аторвастатину індукованої освіту холестерину частинок експонується обидва кульових і лінійні нитки морфології, Розувастатин і флувастатин індукованої освіту холестерину, в той час як частки з тільки кулястих морфології. Вплив статинів на викликають формування лінійні нитки було встановлено близько 16% для Ловастатін, 2% для симвастатину і 0,2% аторвастатину.

Для подальшої оцінки впливу гіполіпідемічні препарати на формування частинок, флуоресцентний мічених холестерину агрегатів індивідуально інкубували з Езетіміб, фібратів, ніацин і Омега-3 жирних кислот. Як зауважив зі статинами, ці наркотики індукованих освіту холестерину частинок з гетерогенними розмірів і форм, як показано в малюнку 4a -d. Серед них, Езетіміб індукованої освіту холестерину частинок експонується обидва кульових і лінійні нитки морфології, тоді як фібратів, ніацин і Омега-3 жирні кислоти індукованої формування частинок тільки кулястих подібний холестерину. Таким чином, вплив препаратів на Стренга лінійної формі холестерину частки формування була близько 3% для Езетіміб, 0% для фібратів, 0% для ніацину і 0% для омега-3 жирні кислоти.

Морфологічний аналіз показав, кожна частка холестерину кулястих або лінійної пасмо формі складається з багатьох дрібних частинок, пов'язаних разом. Розміри частинок флуоресцентні позитивні кулястих холестерину визначені знаходяться в діапазоні від ~ 2-30 мкм2, тоді як розміри лінійної форми частинок знаходяться в діапазоні від ~ 2-60 мкм2.

Аналіз впливу гіполіпідемічні препарати на очищений ЛПДНЩ і ЛПНЩ частинок:

Для подальшого вивчення формування частки холестерину в присутності ліпопротеїнів, флуоресцентний мічених холестерину агрегатів індивідуально інкубували з очищеної ліпопротеїнів дуже низької щільності, ЛПНЩ і ЛПВЩ білків / частинок. Результати показали, в порівнянні з інкубації з ЛПНЩ і ЛПВЩ частки, які холестерину агрегатів інкубували з білків ліпопротеїнів дуже низької щільності, причиною формування більшу кількість холестерину частинок, Малюнок 5. Крім того два головних фракцій холестерину частинок спостерігалися в ліпопротеїнів дуже низької щільності населення, припускаючи їх часткової трансформації в ЛПНЩ фракція під час інкубації з люмінесцентної міткою холестерину агрегатів. Аналіз зображень, часток вказано наявність кульових (~ 97%) і лінійної форми частинок (~ 3%) серед населення ліпопротеїнів дуже низької щільності, ЛПНЩ і ЛПВЩ. Типорозміри кулястих частинок є ~ 2-30 мкм2, тоді як розмір діапазони лінійної частинок ~ 2-60 мкм2.

Для вивчення гіполіпідемічні наркотичний ефект на очищений частинок, часток ЛПДНЩ і ЛПНЩ індивідуально інкубували з Езетіміб, Ловастатін, симвастатину і ніацин. В результаті в порівнянні з контролю експерименти без наркотиків, спостережуваний на формування частинок ЛПДНЩ ефект препарату була вище в Езетіміб, симвастатину, ловастатин і ніацин. Частинки ЛПНЩ, інкубували з наркотиками показав основних одній фракції і лікарсько індуковані вплив на формування частинок був вище в Езетіміб, симвастатину, ловастатин і ніацин, Малюнок 6.

Варіації Гіполіпідемічні ефекти наркотиків в змінюючи розподіл часток холестерину в зразках сироватки:

Попередні експерименти були проведені в буферному розчині з очищеної ліпопротеїнів для оцінки ефекту препарату. Таким чином на наступному кроці, ефективність гіполіпідемічні препарати на формування частинок холестерину був розглянутий з використанням 50 зразків сироватки, зібраних з 25 предметів з дисліпідемії і 25 відповідає віку звичайні предмети. Відповідь наркотиків в кожному зразку сироватки була виміряна на підставі змін в профіль холестерин частки формування в присутності і відсутності ліків. У assay металевої пластинки масиву був показаний кожен зразок сироватки проти Езетіміб, Ловастатін, симвастатину і ніацин наркотиків. Результати показали відмінності між ці препарати в модуляції розподілу часток ліпопротеїнів дуже низької щільності, ЛПНЩ і ЛПВЩ в зразках сироватки, особливо їх вплив на зниження ЛПНЩ і підвищення ЛПВЩ холестерину частки формування. Три представника зразків сироватки дислипидемия, експонується унікальна відповіді на гіполіпідемічні препарати показані на малюнку 7.

Ідентифікація наркотиків ефекту на модулирующих морфологія сироватки похідні ЛПНЩ і ЛПВЩ частинок:

Аналіз фенотипу похідні сироватки холестерину частинок показали наявність лінійної пасма і кулястих форми ліпопротеїнів дуже низької щільності, ліпопротеїнів низької щільності, і HDL субпопуляцій, підтвердивши тим самим аналогічними морфології, виявлених в ході експериментів виконана як в буфері і з очищеної ліпопротеїнів частки, як показано на малюнку 8. Однак розподіл субпопуляцій частки кульових і лінійні форми холестерину широко розрізнялися дисліпідемії і відповідає віку звичайні предмети. Зокрема управління аналізів, виконаних без наркотиків показало, що відмінності в розподілі лінійної пасмо формі LDL холестерину частинок між дисліпідемії (середнє 2,0%) і вік відповідає нормальній (середнє 1,3%) зразки сироватки. Аналогічним чином, підвищений рівень лінійної пасмо формі частки HDL холестерину було відзначено в зразках дислипидемия (середнє 18,3%), у порівнянні з вік відповідає зразки сироватки (середнє 11,1%). В кореляції аналізи виконуються в присутності наркотиків в зразках сироватки дислипидемия, показали значне зниження в лінійній формі HDL холестерину частки формування симвастатин (середнє 8,3%), Езетіміб (середнє 11,5%), ловастатин (середній 11,7%), і не скорочення для ніацину (середнє 18,3%). Крім того було відзначено зниження в формуванні лінійної форми частинок холестерину LDL в зразках сироватки дислипидемия при інкубували з препаратами, відображається в таблиці 1.

Крім того аналізів здійснюється при наявності препаратів в samp сироватку відповідає віку управленіяLes показали значне зниження в лінійній формі частинок HDL холестерину в симвастатин (середнє 5,0%), Езетіміб (середня 8,2%), ловастатин (середня 8,7%) і ніацин (середня 10,8%), як показано в таблиці 2. Дисліпідемії і вік відповідає нормальній сироватки зразків експонується лікарсько індуковані скорочення в лінійній формі ЛПНЩ і ЛПВЩ холестерину частинок показали відносне збільшення кулясту форму холестерину частинок (дані не показані).

Малюнок 1: Схема, що ілюструє процес візуалізації в vitro холестерину частки морфології. (A, b) Додавання гіполіпідемічні препарату в буфер або сироватки зразків. (C) додаванням флуоресціровані позначеного розчинних холестерину агрегатів до зразків. (D) придбання результаті зразки для морфологічного аналізу холестерину нерозчинних частинок за допомогою тепловізійних проточної цитометрії. Масштаб барів = 10 мкм. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 2: визначення двох окремих морфології холестерину частинок за допомогою тепловізійних проточної цитометрії. () Частки відділяються в лінійної або кульових населення на основі текстурного аналізу світлі області зображення. Зокрема точка ділянку означає H однорідність (вісь x) і означає H ентропії (вісь y) містить два закритих регіонів для виявлення кульових (червоний) і лінійної пасмо формі частинок (синій) холестерину. (B) образи відображення морфологія кулястих форми частинок, виявлених в області народонаселення 1. (c) зображення лінійних Стренга формі частинок, виявлених в населення 2. (d) гистограмме показано розподіл всіх частинок флуоресцентні позитивний холестерин використовується для визначення їх концентрації і субпопуляції. Масштаб барів = 10 мкм. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 3: зображення галереї, відображення ефект статинів в модулює освіту частинок холестерину. Яскраві області відноситься до області аналогічні FSC в звичайних проточний цитометр. Зелений канал відноситься до флуоресцірованія викидів, виявлених в 505-560 Нм, і жовтий канал відноситься до флуоресцірованія викидів, виявлених в 560-595 Нм. (Ae) Галереї зображень, відображення морфологія холестерину частинок, що утворюються при наявності Ловастатін, симвастатину, аторвастатин, Розувастатин і флувастатин, відповідно. (F) формування частинок холестерину в відсутність статинів (негативний контроль). Масштаб барів = 10 мкм. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 4: демонструючи диференційований ефект гіполіпідемічні препарати в модулює освіту частинок холестерину. (Ad) Галереї зображень, відображення морфологією частинок холестерину сформовані присутності Езетіміб, ніацин, фібратів і Омега-3 жирних кислот, відповідно. Зелений канал відноситься до флуоресцірованія викидів, виявлених в 505-560 Нм, і жовтий канал відноситься до флуоресцірованія викидів, виявлених в 560-595 Нм. Масштаб барів = 10 мкм. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 5: аналіз формування ліпопротеїнів дуже низької щільності, ЛПНЩ і ЛПВЩ холестерину частинок за відсутності препарату. Точка ділянки: Осі x відображається спектр частинок холестерину, виявлених в зеленій флуоресценцией канал (505-560 Нм) і вісь y відображає стороні Скаттер. Строб показує регіонів ліпопротеїнів дуже низької щільності, ЛПНЩ і ЛПВЩ частинок, виявлених в точка ділянки флуоресценції. () Формування частинок холестерину при наявності очищена ЛПДНЩ. (B) представник зображення частинок ЛПДНЩ. (C) формування частинок холестерину при наявності очищена ЛПНЩ. (D) представник зображення частинок ЛПНЩ. (E) формування частинок холестерину при наявності очищена HDL. (F) представник зображення HDL частинок. Масштаб барів = 10 мкм. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 6: продемонструвати ефект ліпідів, зниження наркотиків на очищений частинок ЛПДНЩ і ЛПНЩ холестерину. () Ліпопротеїнів дуже низької щільності частинок, без наркотиків. (B) ліпопротеїнів дуже низької щільності частинок інкубували з Езетіміб. (C) ліпопротеїнів дуже низької щільності частинок інкубували з lovastatin. (D) ліпопротеїнів дуже низької щільності частинок інкубували з симвастатин. (E) ліпопротеїнів дуже низької щільності частинок інкубували з ніацин. (F) ЛПНЩ частки інкубували без наркотиків. (G) ЛПНЩ частки інкубували з Езетіміб. (H) ЛПНЩ частки інкубували з lovastatin. (Я) ЛПНЩ частки інкубували з симвастатин. (J) ЛПНЩ частки інкубували з ніацин. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 7: флуоресценції точка ділянки диференційований ефект ліпідів, зниження наркотиків в модуляції ліпопротеїнів дуже низької щільності, ЛПНЩ і ЛПВЩ холестерину формування частинок в зразках сироватки. Верхній рядок, скринінгу сироватки 1 показані низького рівня наркотиків реакції в збільшенні 0 до 15% HDL частки формування; середній ряд, скринінгу сироватки 2 показані помірний рівень наркотиків реакції в збільшенні 16 - 50% HDL частинок; Нижній ряд, скринінгу сироватки 3 показані вище рівня наркотиків реакції в збільшенні 51 до 100% HDL частинок. (, F, k) У зразках сироватки без наркотиків. (B, g, l) Зразки сироватки інкубували з Езетіміб. (C, h, m) Зразки сироватки інкубували з lovastatin. (D, i, n) Зразки сироватки інкубували з симвастатин. (E, j, o) Зразки сироватки інкубували з ніацин. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 8: зображення галереї, відображення морфологією частинок холестерину в сироватці зразка 1. Зелений канал показує зображення флуоресценції викиди частинок; сторона точкової (блакитного каналу) показує зображення збудження лазерного світла розсіяні частинки. () Кульових і лінійні форми холестерину частки сформований без наркотиків. (B, c, d, e) Холестерин частки сформовані присутності Езетіміб, Ловастатін, симвастатину і ніацин, відповідно. Масштаб бари = 10 мкм. будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Сироватка IDБез наркотиків (контроль)З ЕзетімібЗ ловастатинЗ симвастатинуз ніацин

Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частки% Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частки% Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частки% Лінійна, частинки ЛПНЩ% лінійна, HDL частки% лінійна, частинки ЛПНЩ% лінійна, HDL частки% навігатор-01 1.73 45.2 0,81 18.1 0,61 16.1 0,59 13,9 2.26 33,6 навігатор-02 2.86 35,9 1.26 30,9 1.27 22.7 0,73 15.2 3.03 37,7 навігатор-03 2.04 35,8 0.87 4.82 1.02 4.14 0,36 3.06 0,45 9.57 навігатор-04 2.56 32,9 1.15 21,8 1.12 18.6 0,77 17.2 3.37 36,5 навігатор -05 0.42 29.2 0,24 5,62 0,22 8.72 0.16 9.91 0,35 22.2 навігатор-06 1.8 28.1 0.4 16,8 0.62 1 5 0.42 9.27 2.28 38,4 навігатор-07 1.8 26.5 0,85 10.5 1.18 19,9 0.62 7.32 1.29 23.4 навігатор-08 0,98 22.8 0,86 7.28 1.55 10.2 0,14 5.98 0,59 13.3 навігатор-09 3.87 22 , 1 1,98 9.56 1,87 10.3 1.46 7.96 2.86 9.88 навігатор-10 4.46 21,9 2.57 13.6 4.04 17.1 2.28 11,9 0.71 25,7 навігатор-11 1,57 19.2 1.15 9.24 1.37 6.98 0.74 5.03 1.37 16 НАВІГАТОРОВ- 12 1.06 16,7 0.66 4.38 0,7 4.74 0.99 6.36 1.14 4.73 навігатор-13 4,85 16,6 1.28 30,4 1.4 32.6 0,8 16,6 4.02 31 навігатор-14 2.08 16 0,68 15.4 0,64 16,5 1.97 10.2 1.25 20.11 навігатор-15 1.5 11,9 1.14 13.3 1.21 11.4 0,8 6.12 1.38 4.59 навігатор-16 1.82 10.4 2.04 9.59 1.24 5,62 0.91 5.38 1.31 7.61 навігатор-17 1.05 10.3 1.02 4.7 1,78 15.1 0.93 7.81 1.27 13 навігатор-18 1.11 8.76 0.54 3.68 0,61 3.51 1.01 5.03 1.02 6.69 навігатор-19 1 8.52 0.75 6.67 0,76 5.86 0.91 8.36 1.22 11,9 НАВ Гатор-20 3.54 7.92 3.78 12 3.56 5.81 3.28 8.28 3.44 12.3 навігатор-21 1,88 7.69 2.12 11.4 1.73 9.54 1.77 8.34 2.32 16,7 навігатор-22 1.64 7.17 0,35 5.75 0.56 13.2 0,14 4.33 1.23 17,8 навігатор -23 1.54 6.27 1.25 7.24 1.02 6.12 0,73 3.58 1.42 6.69 навігатор-24 0,53 6.22 0,52 4.49 0.91 5.57 0.54 4.01 0,65 10.5 навігатор-25 2.97 5.1 1,59 11 1,88 9 1.03 6.54 2.61 29.1

Таблиця 1: скринінг дислипидемия зразків сироватки в assay металевої пластинки масив Показати диференційований ефект гіполіпідемічні препарати. У порівнянні з елементами управління без наркотиків (колонок 2, 3), зразки сироватки інкубували з Езетіміб (колонки 4, 5), ловастатин (колонки 6, 7), симвастатин (колонки 8, 9) і ніацин (колонки 10, 11) показав варіації на відміну лінійної формі ЛПНЩ і ЛПВЩ холестерину формування частинок.

Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частки% Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частки% Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частки% Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частинки% Лінійна, частинки ЛПНЩ% Лінійна, HDL частки% НВП-01 2.05 26.8 0.62 11,9 0.56 16,9 0,52 9.28 1.4 11,9 НВП-02 1.35 26,3 1,68 21,8 2.59 23.6 0, 79 6.92 2.16 29,7 НВП-03 2.4 24.9 0,53 7.54 0,57 13,8 0,55 5.82 1.7 4.71 НВП-04 1.99 21.5 1.54 9.45 1.56 8.25 0.31 3.74 2.88 20,8 НВП-05 1.77 18.8 1.49 6.03 1.65 5.5 0.54 4.67 1.2 8.19 НВП-06 1.12 15.2 0.67 4.42 2.68 13.3 0.5 2.37 1.54 16.3 НВП-07 1.03 14.4 0,79 6.83 1.45 7.91 0.67 5.36 1,57 12 НПП-08 0,98 14.3 0.88 4.48 2 7.1 0 .19 2.66 1.02 18.1 НВП-09 2,85 14.1 1.95 12.6 2.34 12.5 0,7 6.24 1.84 18,7 PNAN10 1.01 10.4 0,8 5.07 0.51 5.9 0.87 6.5 1.63 10.9 НВП-11 0.92 12.4 0,21 9.94 0.29 3.31 0.29 6.52 0,58 10.4 НВП-12 0.6 10.5 0.56 5.78 1.06 4.74 0.4 3.32 0.91 11,8 НВП-13 1.25 10.3 0,45 3.79 0.67 6.53 0,27 3.17 0,8 6.28 НВП-14 1.03 9.86 1.12 8.51 1.05 6.91 0.6 5.94 1.05 8.14 НВП-15 2.28 8.1 1.93 10.4 2.14 8.86 1.56 6,84 2.31 8.61 НВП-16 1,98 7.69 0,45 4.36 1 5.46 0,27 2.89 0,49 4.12 НВП-17 1.72 6.72 0.75 14,8 0.74 9.26 0, 49 5.58 1,98 12,8 НВП-18 2.45 6.38 0,85 16,8 0,89 14.2 0,58 5.9 1.8 20,6 НВП-19 1,67 5.12 0,58 8.63 0,65 5.7 0,64 8.8 1,88 2.08 НВП-20 1.17 4.41 0,85 7.77 0.91 6.43 0,69 5.08 1.21 6.12 НВП-21 0.31 4.18 0.48 6,95 0.19 5.09 0,15 2.1 0.29 5.93 НВП-22 0,77 4.02 1.24 7.41 0,61 5.02 0.29 3.49 0.42 3.98 НВП-23 0.4 1.25 0.75 6.25 0.88 5.91 0.9 5.06 0,82 6.71 НВП-24 0,45 1.1 0,63 2.5 0,55 5.32 0.9 4.3 0.71 3.5 НВП-25 0,36 1 0,73 2.4 0.66 5.1 0,82 4 0,7 3. 4

Таблиця 2: скринінг відповідає віковій контроль зразків сироватки в assay металевої пластинки масив показують диференційований ефект гіполіпідемічні препарати. У порівнянні з елементами управління без наркотиків (колонок 2, 3), зразки сироватки інкубували з Езетіміб (колонки 4, 5), ловастатин (колонки 6, 7), симвастатин (колонки 8, 9) і ніацин (колонки 10, 11) показав варіації на відміну лінійної формі ЛПНЩ і ЛПВЩ холестерину формування частинок.