In Vitro Model of Physiological and Pathological Blood Flow with Application to Investigations of Vascular Cell Remodeling

Забезпечення умов потоку залежить від правильного складання схеми потоку (рис 1). Діаметр трубки є важливим вибору в зборі, з великими діаметрами, що знижують опір течією і подальше падіння тиску до і після культивування камери. Для забезпечення швидкості, призначений тиску і витрати, зібрати систему з витратоміром, перш ніж експерименту з передбачуваної трубки. Вирівнювання культура камери вакуумного каналу (рис 2), з перфорацією на силіконовій прокладці (нема на фото), підтримує друк в схемі потоку. Щоб забезпечити ущільнення, пружинні затискачі можуть бути використані для застосування додаткового тиску на прокладку. Скляні слайди повинні бути захищені полікарбонатного листа, вирізати, щоб відповідати площі камери (рисунок 6). Оскільки швидкість потоку може додатково сприяти ускладнень в підтримці ущільнення, засоби масової інформації, можуть бути змінені шляхом додавання декстрану для підвищення в'язкості носія. В результаті збільшення Viscosность, зрушення рідини можна підтримувати на більш низькій швидкості. Реагування і цілісність системи може бути перевірена в середині експерименту, просто спостерігаючи за рівнями рідини і колір рідини в демпфирующей камері і резервуар (рисунок 3). Рівень рідини повинен підтримувати постійне значення. Початковий рівень рідини повинен бути відзначений як на водосховищі і демпфірування камеру для порівняння техогляду. Коригування можуть бути зроблені шляхом додавання засобів масової інформації в експерименті ініціації, або дозволяючи вхід повітря в камеру демпфірування. Малюнок 4 ілюструє характерний запис швидкості потоку. Фенол червоний колір має зменшуватися протягом усього експерименту. Після закінчення експерименту, середовище має стікати зі схеми, і зберігали при -80 ° C морозильнику для майбутнього використання або заходи. Медіа можуть бути проаналізовані на вміст метаболіту або випущений цитокіни, або використовуватися для моніторингу паракринного сигналізацію клітинних реакцій при використанні його для культу клетокЮр. Клітини можуть бути відображені в умовах фазового контрасту мікроскопії для морфології і злиття (рис 5). Шпиндель морфологією спостерігається в ЕК після ФВЧ протягом 24 год (рис 7).

Малюнок 1. Потік принципова схема. Регулятор потоку позначені у схемі використовується для вимірювання рівня індексу пульсації, встановлені загасання камери. Потік сигналу повинна бути виміряна з діаметрами, призначених з'єднання труб для забезпечення тиску в системі залишається фізіологічна. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 2. ча потоку mber дизайн і вимірювання. Зовнішній канал підключений до вакуумі. Центр картина демонструє фіксацію камери. Зображення праворуч ілюструє конструкцію прокладки. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 3. Потік демпфірування палата. Потік демпфірування камера схематично вказує напрямок потоку призначені і зв'язок. Повітряний випускний клапан відкритий, випускний клапан закритий, і рідина заповнює камеру до необхідного рівня PI. За відкриття випускного клапана і закриття клапана для випуску повітря, резюме потоку і рівня рідини в камері підтримує рівень. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

>

Малюнок 4. Хвилі потоку проби з різними індексами пульсації. Висока пульсації потоку (зліва) і низькою пульсації витрати (праворуч). Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 5. Спільне культивування потоку Принципова. Спільне культивування показує пульсуючу подачу над ендотеліальних клітин, з гладком'язових клітин в колагеновий гель. Вивільнення цитокінів з клітин може переступити через пористу мембрану з полікарбонату. Будь ласка, Натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 6. Ендотеліальних клітин Морфологія Зміни до умов потоку. Зливний ендотеліальних клітин на культуру функціоналізованих полікарбонатну мембрану. Показані раніше, ніж потік (зліва) і після (праворуч потоку). Потік показаний при різних умовах, статичний (без швидкості), стійкий (постійна швидкість), високий пульс (високий пульсації). Клітини фарбували 2% кристалічним фіолетовим. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися велику версію цієї фігури.

Малюнок 7. Гладких м'язів Стільниковий Експресія білка Зміни до умов потоку. Клітинах гладеньких м'язів експресія альфа-гладких м'язів актину (SMA) і важкого ланцюга міозину (SM-МНС) в різних умовах, статичний (без швидкості), стійкий потік (постійна швидкість), і високий пульс. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися більше Версія цієї фігури.