Методика визначення кількісного вмісту дубильних вещест в перерахунку на галловую кислоту

Дубильні речовини або танніди - похідні пирогаллола, пірокатехіна, флороглюцину, відрізняються дубильними властивостями

і є високомолекулярними, генетично пов'язаними між собою природними фенольними сполуками з молекулярною масою від 1000 до 20000. Прості феноли не є дубильними речовинами, але в комплексі з фенолкарбонові кислоти супроводжують дубильні речовини.

Поширення.

У природі безліч рослин, особливо дводольних, містять дубильні речовини. З нижчих рослин вони можуть зустрічатися в водоростях, грибах, лишайниках, з спорових - в папороті, хвоща, мохах. Великою кількістю дубильних речовин мають представники сумахових, букових, вересових, гречаних, вербових, соснових. У родинах миртових, бобових, розоцвітих нараховуються численні види і пологи, в яких міститься до 20-30% дубильних речовин. Найбільша кількість (50-70%) виявлено в галлах - патологічних утвореннях. Тропічні рослини найбільшою мірою багаті таннідамі.

Дубильні речовини можуть міститися в надземних і підземних частинах рослин, накопичуватися в соку клітин. У листі рослин вони знайдені в клітинах паренхіми і епідерми, які оточують провідні жилки і пучки, в кореневищах і коренях вони акумулюються в серцевинних променях і в паренхімі кори.

Фактори, що сприяють накопиченню дубильних речовин.

За даними лабораторного контролю якості кількість дубильних речовин, що містяться в рослині, залежить від віку, району зростання, грунтових і кліматичних умов. Висотний фактор також має велике значення. Високогірні рослини, такі як сумах, скумпія, бадан, містять багато дубильних речовин. Інтенсивність освітлення підвищує вміст таннидов у одних рослин і зменшує у інших, тому не є вирішальним фактором. Рослини, що живуть у вологих місцях, багатше дубильними речовинами, ніж в сухих. Чим молодше рослина, тим більше в ньому міститься дубильних речовин. Від 7 до 10 години ранку в рослинах виявлено максимальний вміст таннидов, в середині дня - мінімальне, а до вечора знову зростає.

Біологічне значення.

Не дивлячись на використання різних схем контролю якості, не вдалося до кінця з'ясувати роль таннидов для рослин. Можливо, вони акумулюються в підземних органах рослин, як запасні речовини, і, володіючи фунгіцидними і бактерицидними властивостями (похідні фенолу), оберігають деревину від гниття, тобто захищають рослини від захворювань, викликаних патогенними збудниками.

Фізико-хімічні властивості.

Танніди, в основному аморфні речовини, добре розчиняються в спирті і воді, володіють терпким смаком. У розчині мають слабокислу реакцію. Тільки катехіни відомі в кристалічному стані, вони краще розчинні в гарячій воді, в холодній майже не розчинні. Майже всі танніди наділені оптичною активністю. Більшість з них гігроскопічні. При взаємодії дубильних речовин з алкалоїдами, білками і солями важких металів утворюються опади, тому їх не можна змішувати в лікарських засобах. Дубильні речовини утворюють з білками плівку, яка є непроникною для води (процес дублення). При цьому відбувається згортання білків з утворенням на поверхнях ран і слизових оболонках захисної плівки. Контроль якості сировини показав, що при взаємодії з киснем повітря (різка кореневищ рослин) відбувається окислення дубильних речовин з утворенням флобафенов або Красень, що призводить до темно-бурого фарбування кори і інших органів рослин, настоїв і відварів.

Заготівля.

Заготівлю рослин необхідно проводити в період, коли в них накопичується найбільша кількість таннидов. Дані лабораторного контролю якості свідчать про необхідність якомога швидше висушити сировину після його збору, так як відбувається гідроліз і окислення дубильних речовин під впливом ферментів. Сушити сировину рекомендують при температурі повітря 50-60 ° С. Зберігають щільно упакованим в сухому провітрюваному приміщенні, при можливості, в цілому вигляді, так як подрібнену сировину буде швидко окислюватися внаслідок збільшеної поверхні взаємодії з повітрям.

Сировину, отриману з лікарських рослин, в обов'язковому порядку повинно проходити контроль якості сировини і відповідати високим фармакопейним вимогам, а також має бути стандартизованим.

Застосування.

Дубильні речовини призводять до денатурації білків клітин, при цьому утворюється захисна альбумінатная плівка, що надає бактеріостатичну або бактерицидну дію на мікроорганізми. Лікарську сировину, яке містить дубильні речовини, володіє терпкими властивостями, тому може використовуватися у вигляді полоскань при лікуванні фарингіту, ангіни, стоматиту, у вигляді компресів - при опіках, саднах і порізах, всередину - при захворюваннях шлунка і кишечника, а також при отруєннях рослинними отрутами і важкими металами.

Згідно з даними лабораторного контролю якості у великій кількості дубильні речовини знаходяться в зеленому і чорному чаї, чорній смородині, кизил, айву, хурмі. Ці продукти харчування мають Р-вітамінною дією і незамінні при радіоактивному ураженні, профілактиці відкладення солей важких металів, при діареї, чудово показують себе в якості протиотрути.

Визначення кількості дубильних речовин.

Відомі кілька схем контролю якості для визначення кількісного вмісту таннидов. Пропонована нижче методика дозволяє підвищити точність аналізу і визначити окремо кількість не загрожених і загрожених таннидов.

Подрібнюють рослинну сировину. Точну наважку (приблизно 2 г) просівають через сито, що має діаметр отворів 3 мм, переміщують в конічну колбу об'ємом 500 мл, наливають 250 мл дистильованої води, нагрітої до кипіння, і кип'ятять зі зворотним холодильником на електроплитці протягом 30 хвилин при періодичному помішуванні. Охолоджують отриману рідину до кімнатної температури, доливають водою до обсягу 250 мл, потім проціджують через вату, щоб в водне витяг не були частки сировини. Перші 50 мл отриманого витягу видаляють.

Визначення загальної кількості дубильних речовин.

2-4 мл розчину (аліквотна проба) наливають в мірну колбу на 50 мл і доводять розчин до мітки (розчин № 1). Проводять вимірювання щільності оптичної розчину за допомогою колориметра (довжина хвилі 277 нм). Використовують воду в якості розчину порівняння.

Загальна кількість дубильних речовин розраховують за формулою

де:

ХА - вміст загального колічестватаннідов, перерахованого за галловой кислоті,%;

D 1 - значення щільності оптичної розчину № 1;

m нав. - точне значення маси сировини в навішуванні (г);

Va - об'єм проби (мл);

250 - кількість загального об'емараствора (мл);

50 - об'єм розчину № 1 (мл);

508 - значення щільності оптичної 1% -го розчину кислоти галової 1 мг / мл (значення питомого показника поглинання галової кислоти);

W - значення вологості сировини (%).

Визначення дубильних речовин, які осідають за допомогою розчину осадження.

30 мл отриманого розчину наливають в мірну колбу на 50 мл, додають 4-10 мл реактиву для осадження (1% -ий розчин колагену в 1% -ої оцтової кислоти), перемішують, фільтрують. 2-4 мл фільтрату (аліквотна проба) наливають в колбу на 50 мл, доводять розчин до мітки (розчин № 2). Проводять вимірювання щільності оптичної розчину за допомогою колориметра (довжина хвилі 277 нм). Використовують воду в якості розчину порівняння.

Вміст дубильних речовин, загрожених за допомогою розчину осадження, розраховують за формулою

де:

ХА - зміст загальної кількості таннидов, перерахованого за галловой кислоті,%;

D 1 - значення щільності оптичної розчину № 1;

D 2 - значення щільності оптичної розчину № 2;

m нав. - точне значення маси сировини в навішуванні (г);

Va - об'єм проби (мл);

250 - кількість загального обсягу розчину (мл);

50 - об'єм розчину № 2 (мл);

508 - значення щільності оптичної 1% -го розчину кислоти галової 1 мг / мл (значення питомого показника поглинання галової кислоти);

W - значення вологості сировини (%)