Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Починаючи з 24 - 72 годин після П. палички для ін'єкцій, збільшилася клітинної спостерігалося в зрізах легенів (1А-D). Легких почала відновлюватися від 96 год після травми (рис 1E). На 7 днів після P. палички, нормально альвеоли морфологія була в значній мірі відновлений (рис 1F). Фарбування Tunnel розділи за допомогою легких підготовлений на 24 год повідомленням П. палички показали загибель клітин в альвеолах клітин (рис 1G-I). З метою вивчення процесу в цій моделі пошкодження ремонту, BrdU вводили мишам в 3 дня після P. палички. Легкі були ізольовані на 5 годин після ін'єкції BrdU і оброблені для фарбування BrdU антитілами. Як показано на малюнку 1J і К, значно збільшилася кількість клітин, включених BrdU при 72 ч після P. Адміністрація палички із зазначенням гіперпроліферацію.

Для вивчення змін в бар'єр напроніцаемості і запалення після травми, бронхоальвеолярного лаважу (BAL) рідина збирали в різні моменти часу після P. палички для ін'єкцій. Концентрацію білка в BAL була значно збільшена на 48 год після P. палички для ін'єкцій (2А), що вказує на епітеліальний бар'єр нещільності. Цифри клітин в БАЛ також значно збільшився в 48 ч повідомленням П. палички для ін'єкцій (2В), що вказує на запальну реакцію. На 4 - 5 днів поштових P. палички для ін'єкцій, і рівень білка BAL і число клітин почала знижуватися з пропозицією відновлення (Фігура 2А, В). Крім того, легких лизат був зібраний в різних точках напишіть P. Адміністрація палички і рівень білка макрофагів запальне 2 (MIP2), цитокіни, що бере участь у залученні нейтрофілів 12, вимірювали за допомогою ELISA. Відповідно до результатів аналізу БАЛ, рівень MIP2 значно increa СЕД на 48 год повідомленням П. палички для ін'єкцій і повернувся в базального рівня в 96 ч повідомленням П. палички для ін'єкцій (рис 2С). Крім того, клітини БАЛ були зафіксовані на стеклах і піддавали фарбування гематології. Без P. палички, з'явилися лише невелике число моноцитів в БАЛ (рис 2D). На відміну від цього, велика кількість нейтрофілів були присутні в BAL ізольовані на 48 год після P. палички для ін'єкцій (рис 2 Е). До 96 год повідомленням П. палички для ін'єкцій, клітинний склад БАЛ повернувся на рівень управління (рис 2F). Підводячи підсумок, призводить малюнку 2 показано гострий нейтрофільний запальну реакцію разом зі збільшенням альвеол бар'єру проникності і збільшення концентрації цитокінів, які всі ознаки гострого пошкодження легенів 13. У всіх експериментах, це ін'єкції фізіологічного розчину використовували в якості контролю.

Малюнок 1. Гістологія, загибель клітин і проліферації в P. палички опосередкованої миша модель пошкодження легенів. Ізоляція (AF) легких, секціонування і H / E фарбування проводили з використанням НЕ-П. палички уприскуванням (НЕ PA) контролю легкі (A), а також легкі в 24 годин (В), 48 ч (C), 72 ч (D), 96 ч (E), 7 днів (F) після П. палички впроекція (пост-PA). (GI) секції легких були отримані з контрольних легких (G) і 24 годин пост P. палички вводять легкі (H, I) і перейдіть на TUNEL аналізу для виявлення загибелі клітин. Розділи легких фарбували для легких епітеліальних клітин маркера SP-C (синій), T1α (червоний), щоб показати, морфологію, а також фарбують протягом TUNEL (зелений). Стрілки в (H) вказують TUNEL-позитивних клітин. (J, K) вводили BrdU в не-P. палички вводять мишам (J) і 72 годин після P. палички вводять мишам (K) за ф, легкі були підготовлені на 5 годин після ін'єкції BrdU і обробляються для фарбування антитіл проти BrdU (зелений фарбування). Шкала бар = 60 мкм для АФ, 50 мкм для G і H, 20 мкм для I і 100 мкм для J і K. Ця цифра була змінена з Лю 7. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися збільшену версію цієї фігури.

Малюнок 2. альвеолярного проникність бар'єра і запалення наступне P. палички індукованого ушкодження легень. (А, В) BAL були зібрані від контролю і P. палички лікування легких. (А) Концентрація білка в БАЛ збільшена на 48 год повідомленням П. палички уприскування і зниження на 96 годин, 5 днів після P. паличка уприскування. (B) Всього число клітин в БАЛ збільшена на 48 год повідомленням П. палички для ін'єкцій (B) і налаштовували рівень управління в 96 ч повідомленням П. палички для ін'єкцій. (C) MIP-2 були виміряні рівні насING лізати легких, виділені з контрольних мишей, а також мишей на 48 годин і 96 годин після П. палички для ін'єкцій. Дані були представлені на середнє ± SE, п ≥ 3. (DF) Клітини БАЛ центрифугировали і фіксується на стеклах і піддавали фарбування HEMA3. Невелика кількість моноцитів були присутні в БАЛ контрольних мишей (D). Велика кількість нейтрофілів були присутні в БАЛ ізольовані на 48 год повідомленням П. палички для ін'єкцій (Е). До 96 год повідомленням П. палички для ін'єкцій, була невелика кількість моноцитів в BAL (F). Шкала бар = 10 мкм, ці результати є репрезентативними щонайменше 5 незалежних експериментів. Ця цифра була змінена з Лю і ін. 7. Будь ласка, натисніть тут, щоб подивитися збільшену версію цієї фігури.