ХАРАКТЕР МОРФОЛОГІЧНИХ ПЕРЕТВОРЕНЬ дерми В УМОВАХ РОЗВЕДЕННЯ Філер

1. бібліографічна ПОСИЛАННЯ

1 Могильна Г.М. 1 Фомічова Є.В. 1 Блатт Ю.Є. 2

1 ГБОУ ВПО «Кубанський державний медичний університет»

2 ТОВ «Мерц ФАРМ»

В експерименті вивчено морфологічні та гістохімічні перетворення, що відбуваються в дермі в зоні локалізації препарату «Радіесс» (Merz) в стандартній концентрації і при розведенні стерильним фізіологічним розчином у співвідношенні 1: 2 і 1: 6. Препарат вводили щурам-самцям субдермальних в обсязі 0,05 мл. Оцінку результатів проводили через 2 і 4 місяці після ін'єкції філлера. Морфологія компонентів дерми вивчена в мікропрепаратах, забарвлених гематоксилін-еозином, за Ван Гизону, Маллорі і Массон. Для типування фібрилярних структур дерми використовували забарвлення пікросіріусом червоним. Проведена морфометрія ядер клітин і дана оцінка їх оптичної щільності. Показано, що відповідна реакція цитогенной компонента і екстрацелюлярного матриксу дерми при введенні розведеного препарату «Радіесс» проявляється формуванням сполучнотканинною капсули і появою в зоні локалізації мікросфер значної кількості клітин, що формують клітинний інфільтрат. Величина оптичної щільності ядер клітин наростає, що вказує на підвищення функціональної активності ДНК, процес неоколлагеногенеза зсувається в бік синтезу колагену III типу. C збільшенням дози розведення процес неоколлагеногенеза зміщується в бік завершення позаклітинного етапу його синтезу і утворення колагену I типу.

кристали гідроксиапатиту

філлер

препарат Радіесс

неоколлагеногенез в дермі

1. Могильна Г.М., Фомічова Є.В. Динаміка морфологічного статусу дерми у відповідь на введення кристалів гідроксиапатиту // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2013. -№ 6. - URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=11087.

2. Могильна Г.М., Фомічова Є.В., Терехов А.Я., Блатт Ю.Є. Динаміка компонентів дерми у відповідь на введення філлера // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2015. - № 4. - URL: https://science-education.ru/ru/article/view?id=21161.

3. Чайковська Е.А. Радіесс: аспекти безпеки препарату. Огляд літератури / Е.А. Чайковська, Т.Д. Канарейцева // Ін'єкційні методи в косметології. - 2013. - № 1. - С. 28-44.

4. Daley T. Oral lesions associated with injected hydroxyapatite cosmetic filler / T. Daley, DD Damm, JA Haden, MT Kolodychak // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. Oral Radiol. - 2012. - P. 107-111.

5. Drobeck HP Histologic observation of soft tissue responses to implanted, multifaceted particles and discs of hydroxylapatite / HP Drobeck, SS Rothstein, KI Gumaer, AD Sherer, RG Slighter // J. Oral Maxillofac Surg. - 1984. - Vol. 42 (3). - P. 143-149.

6. Eversole R. Lip augmentation dermal filler reactions, histopathologic features / R. Eversole, K. Tran, D. Hansen, J. Campbell // J. Head Neck Pathol. - 2013. - Vol. 7. - P. 241-249.

7. Lemperle G. Human histology and persistence of various injectable filler substances for soft tissue augmentation / G. Lemperle, V. Morhenn, V. Charrier // Aesthetic Plast. Surg. - 2003. - Vol. 27 (5). - P. 354-366.

8. Sabo E. Computerized morphometry as an aid in determining the grade of dysplasia and progression to adenocarcinoma in Barrett's esophagus / AH Beck, EA Montgomery // Laboratory Investigation. - 2006. - Vol. 86. - P. 1261-1271.

9. Pavicic T. Calcium hydroxylapatite filler: an overview of safety and tolerability // J. Drugs Dermatol. - 2013. - Vol. 12. - P. 996-1002.

10. Pearce A. Histochemistry. Theoretical and applied. - London, 1968. - 561 p.

11. Quan T. Enhancing structural support of the dermal microenvironment activates fibroblasts, endothelial cells, and keratinocytes in aged human skin in vivo / T. Quan, F. Wang, Y. Shao // J. Invest Dermatol. - 2013. - Vol. 133. - P. 658-670.

Огляд літератури, присвячений препарату «Радіесс», широко використовується в естетичній медицині, з усією очевидністю підтверджує ефективність і безпеку цього філлера для контурної пластики обличчя [1-4; 7; 10]. Відповіддю на його введення може бути реактивне запалення по типу «реакція тканини на чужорідне тіло» [5; 11]. Однак отримання ліфтинговий ефект, збільшення обсягу екстрацелюлярного матриксу дерми, досить пролонгований період його дії - все це говорить на користь доцільності використання «Радіесс» в медицині [9]. Спостережувані в клініці ускладнення після введення препарату дуже рідкісні і найчастіше пов'язані з можливим ризиком міграції філлера із зони його введення c подальшим розвитком гранульом [3; 4]. Вважають, що одним із шляхів усунення ускладнень подібного типу може бути розведення філлера анестетиком або фізіологічним розчином. Це повинно зробити більш комфортною саму процедуру введення, а також забезпечити сприятливий перебіг Постін'єкційних періоду [3]. Разом з тим ми не зустріли в літературі робіт, що стосуються реакції дерми на введення препарату «Радіесс» в умовах його розведення.

Метою даного дослідження є морфологічний і гистохимическое вивчення відповідної реакції цитогенной компонента і екстрацелюлярного матриксу дерми на ефект розведення препарату «Радіесс».

Матеріал і методи

Об'єктом дослідження послужили безпородні щури-самці вагою 200-250 г (25 особин). Експеримент проводився з дозволу Етичного комітету ФГБОУ ВО «КубГМУ» МОЗ Росії з дотриманням «Правил проведення робіт з використанням експериментальних тварин». Тварини були розділені на 4 групи. Першій групі вводили препарат «Радіесс» (Merz) в стандартній концентрації. У другій групі препарат перед введенням розбавляли стерильним фізіологічним розчином у співвідношенні 1: 2, в третій групі розведення проведено в співвідношенні 1: 6. Четвертої групи контрольних тварин вводили стерильний фізіологічний розчин в тій же дозі. Препарат вводили субдермальних за принципом мікропапул в обсязі 0,05 мл в задню частину шиї (загривок) всім експериментальним тваринам. Оцінку результатів проводили через 2 і 4 місяці після ін'єкції філлера. Для морфологічного вивчення використовували шматочки шкіри з закладенням матеріалу в парафін. Отримані зрізи фарбували гематоксиліном і еозином, а також за допомогою реакції з Маллорі, Ван Гизону і Массон. Для типування фібрилярних структур дерми використовували забарвлення пікросіріусом червоним по Dayan et al. (1989) c наступним вивченням мікропрепаратів в поляризованому світлі. Для виборчого виявлення ДНК використовувалася реакція Фельгена [10]. Отримані мікропрепарати піддавали комп'ютерної морфометрії з використанням стандартизованих мікрофотографій в форматі TiF, отриманих з цифрової камери для мікроскопії DCM 310. Аналіз отриманих зображень проводили по комп'ютерній програмі Scion Image фірми Scion Corporation, сертифікованої 2000 року National Institute of Heals (USA). Числові значення результатів вимірювань висловлювали в одиницях, заданих програмою Scion Image. Виміру піддавали діаметри ядер клітин дерми, оптичну щільність ядер, а також визначали обсяг ядерної маси, що характеризує кількість ядерного матеріалу, що припадає на одиницю об'єму досліджуваної тканини. Діаметри ядер використовували для розрахунку індексу ядерної симетрії [8]. Всі цифрові дані піддавали статистичній обробці з використанням програми Microsoft Excel.

Отримані результати та їх обговорення

Вивчення зрізів в забарвленні стандартними гістологічними методами показало, що через 2 місяці після ін'єкції Радіесс в зоні його введення чітко тіпірующіх мікросфери, розташовані групами і поодинці. Вміст їх забарвлене дуже слабо дифузно або не пофарбовані. Стінки мікросфер чітко контурируются за рахунок помірно або інтенсивно забарвлених фібрил, між якими вдається розглянути інтенсивно забарвлені сплощені ядра (рис. 1 А, Б).

А Б

Мал. 1. А. Зоналокалізації мікросфер (забарвлення гематоксиліном і еозином. Об.10х, Ок.10х). Б. Зоналокалізації мікросфер (забарвлення гематоксиліном і еозином. Об.40х, Ок.10х)

Місцями зустрічаються багатоядерні клітини сторонніх тіл, за розміром відповідні мікросфер, число ядер в них від 5 до 8. По периферії зони ін'єкції тіпірующіх в поодинокі епітеліоїдних гігантські клітини. Усередині зони ін'єкції видно ділянки, заповнені круглоклітинна інфільтратом. Зона ін'єкції має чіткі межі за рахунок сформувалася навколо неї сполучнотканинною капсули. При цьому одна частина капсули, звернена до дерми, представлена ​​великою кількістю інтенсивно забарвлених колагенових волокон, а протилежна поверхня містить більш тонкі волокна і менше їх число.

Після розведення Радіесс 1: 2 в оглядових мікропрепаратах чітко видно по периферії зони ін'єкції філлера велике число кровоносних судин, заповнених еритроцитами. Структура тканини, яка формує капсулу, може бути охарактеризована як пухка сполучна тканина з невеликою кількістю клітинних елементів. Волокна екстрацелюлярного матриксу тонкі, лежать неупорядоченно, ділянки аморфного Оксифільні пофарбованого матриксу вакуолізований. Від місця ін'єкції до зони локалізації гранул можна побачити невелику кількість щільних оксифільних волокон, вони вказують на шлях зміщення введеного філлера від зони ін'єкції до глибоких шарів. Мікросфери оточені клітинами, розпластаними по їх поверхні. Вміст мікросфер розпушити, місцями відсутня (рис. 2А).

А Б

Мал. 2. Зоналокалізації мікросфер (забарвлення гематоксиліном і еозином: А. Об.100х, Ок.10х; Забарвлення по Массон. Б. Об.10х, Ок.10х)

Навколо мікросфер досить багато клітин фібробластичного ряду, переважно з гіперхромними ядрами. У дермі над ділянкою введення Радіесс спостерігається збільшення числа колагенових волокон, при цьому вони широкі і щільно упаковані: і сосочковий і сітчастий шари виглядають однаково, межа між ними нівелюється.

При вивченні зони ін'єкції філлера в розведенні 1: 6 відзначається більш глибоке його занурення, це вже не субдермальних межа, а ділянку на кордоні з м'язовою тканиною.

Групи мікросфер оточені більш щільною сполучнотканинною капсулою. Вміст мікросфер відрізняється крихкістю, навколо них зберігається один ряд сплощені клітин, які формують капсулу. Між микросферами накопичується велика кількість клітин типу фібробластів і макрофагів, окремі клітини характеризуються наявністю дисперсних ядер. Між микросферами з'являються досить широкі прошарки пухкої волокнистої сполучної тканини з великою кількістю кровоносних капілярів, заповнених кров'ю (рис. 2Б).

Таким чином, при розведенні філлера відбувається занурення його з ефектом збільшення обсягу фіброзної тканини, яка формує для нього капсулу, яка тіпірующіх у вигляді щільних колагенових тяжів, що йдуть від зони дерми в глибину прилеглих до неї тканин.

Змінюється і характер цитогенной компонента, навколишнього мікросфери. Так, при розведенні Радіесс 1: 6 з'являються клітинні тяжі, а навколо мікросфер накопичується вже не один, а кілька, частіше два-три ряди клітин, де перший - це, ймовірно, неактивні фібробласти: сплощені клітини з гіперхромними ядром, швидше за все (фіброціти ), а навколо них - різного типу мононуклеари.

Не виключено, що виділяються ними медіатори ініціюють ефект присутності в зоні ін'єкції великої кількості клітин. При цьому число клітин в ряду: Радіесс - Радіесс 1: 2 - Радіесс 1: 6 наростає. У всякому разі збільшення числа клітин в зоні локалізації філлера типово для ефекту його розведення.

Через 4 місяці після ін'єкції Радіесс при використанні стандартних гістологічних реакцій в мікропрепаратах видно зберігається навколо зони ін'єкції капсула, утворена колагеновими фибриллами, між ними зустрічаються кровоносні судини, заповнені еритроцитами. Мікросфери Радіесс частіше порожні і зберігають на своїй поверхні один шар фиброцитов. Однак між микросферами видно багатоядерні клітини. Цитоплазма цих клітин піниста, в ній виявляються дрібні точки, відповідні фагоцитовані кристалів гідроксиапатиту. Не виключено, що тут йде процес їх утилізації.

При розведенні препарату Радіесс в співвідношенні 1: 2 відмічається зниження числа мікросфер. Вміст їх стає пухким, місцями мікросфери втрачають фибриллярную оболонку. Однак між микросферами з'являються ділянки, що містять клітини з округлими гіперхромними ядрами (лімфоцити). Місцями зустрічаються гігантські багатоядерні клітини. Вимірювання обсягу ядерної маси в зоні ін'єкції показало збільшення її обсягу, особливо виражене при розведенні 1: 6. Збільшення оптичної щільності ядер при фарбуванні по Фельгену в ряду: Радіесс без розведення, Радіесс 1: 2 і Радіесс 1: 6, склав 126,1 + 1,32; 142,36 + 6,6 і 151,06 + 3,0 відповідно, що свідчить про наростання функціональної активності ДНК.

Вивчення екстрацелюлярного матриксу дерми після фарбування пікросіріусом червоним в поляризованому світлі показало, що через 2 місяці після ін'єкції Радіесс в стандартній концентрації навколо мікросфер візуалізуються тонкі фібрили, які виявляють зелене свічення. Серед них зустрічаються більш короткі широкі фібрили, які виявляють жовте і червоне свічення. У процентному співвідношенні обсяг цих волокон склав 50, 30 і 20% (рис. 3А).

Поза зоною ін'єкції ділянки дерми містять широкі фібрили різної довжини з червоним і оранжево-жовтим світінням, зелене свічення візуалізується у вигляді невеликих коротких штрихів.

А Б

Мал. 3. Зоналокалізації мікросфер. (Забарвлення пікросіріусом червоним. Поляризаційна мікроскопія. Об.40х; Ок.10х А, Б)

При розведенні препарату 1: 2 у всіх зразках спостерігається досить одноманітна картина. Навколо мікросфер тонкі фібрили виявляють зелене свічення, їх більшість - до 80%, серед них зустрічаються у вигляді штрихів структури, які виявляють жовте світіння - до 20%; структури, які виявляють червоне свічення, практично відсутні. Поза зоною ін'єкції ділянки дерми містять фібрили різної довжини з червоним і оранжево-жовтим світінням, зелене свічення візуалізується у вигляді коротких штрихів.

У зоні введення препарату Радіесс, розведеного 1: 6, навколо мікросфер переважають фібрили із зеленим світінням, їх до 60%, решта фібрили виявляють оранжево-червоне свічення. Є ділянки, де зелене свічення практично відсутня, тут превалюють фібрили, які виявляють червоне свічення, які мають вигляд тонких волокон, що оточують порожні мікросфери.

Таким чином, виявилося, що через 2 місяці після ін'єкції розведеного препарату Радіесс в співвідношенні 1: 2 процес неоколлагеногенеза зсувається в бік синтезу колагену III типу. Зі збільшенням дози розведення 1: 6 відбувається активація неоколлагеногенеза зі зрушенням в бік завершення позаклітинного етапу його синтезу з утворенням до 40% загального обсягу фибриллярного компонента колагену I типу.

Вивчення екстрацелюлярного матриксу дерми після забарвлення пікросіріусом червоним з подальшою поляризационной мікроскопією показало, що через 4 місяці після ін'єкції препарату Радіесс мікросфери зберігають тонку фибриллярную капсулу, яка виявляє переважно червоне свічення за рахунок колагену I типу, серед якого трапляються поодинокі «штрихи» фібрил зеленого кольору - це колаген III типу.

Через 4 місяці після ін'єкції Радіесс в розведенні 1: 6 видно, що філлер занурений вглиб тканини за межами дерми. При поляризационной мікроскопії стінка мікросфер містить волокна, які виявляють оранжево-червоне і зелене свічення, число цих волокон знаходиться в однаковому співвідношенні, що вказує на наявність двох типів колагену: I і III. У зоні поза соединительнотканного тяжа превалює зелене свічення за рахунок колагену III типу (рис. 3Б).

Порівняльне вивчення клітин і екстрацелюлярного матриксу дерми у відповідь на введення препарату Радіесс показало, що ефект розведення проявляється: формуванням сполучнотканинною капсули і появою в зоні локалізації збережених мікросфер значної кількості клітин, що формують клітинний інфільтрат. Не виключено, що ці зміни є результатом розведення препарату фізіологічним розчином з утворенням більш рухомий маси ін'єкційного препарату, яка не утримується в субдермальних зоні, а зміщується в більш глибокі шари.

Проведене нами дослідження обсягу ядерної маси показало, що в умовах розведення він дійсно наростає, складаючи 27,2 + 1,3 в контролі і 31 + 1,6 (p <0,01) і 36,9 + 1,5 (p < 0,001) при розведенні 1: 2 і 1: 6 відповідно. Слід зазначити, що при розведенні філлера 1: 6 переважають гіперхромні ядра, причому збільшення дози розведення до 1: 6 привело до наростання маси гіперхромних ядер майже в 2 рази (рис. 4).

Однак форма ядер цитогенной компонента, що є за сучасними уявленнями прогностичним показником неопластических змін, в умовах використаного розведення не змінювалася, індекс ядерної симетрії становив в середньому 2,0 + 0,18 і 1,95 + 0,13 (р> 0,05) (при початковому статус для Радіесс без розведення 1,83 + 0,12 р> 0,05) [8]. Характерним для цих ядер є наростання їх оптичної щільності, що виявляється в препаратах, забарвлених реакцією Фельгена. Це наростання оптичної щільності є результатом вивільнення великої кількості альдегідних груп в процесі кислотного гідролізу, що може вказувати на підвищення функціональної активності ДНК, необхідної клітинам дифферона фибробласта для активації синтезу колагену.

Мал. 4. Характеристика ядер клітинного компонента дерми через 4 місяці після введення філлера: 1 - ядерна маса; 2 - гіперхромні ядра; 3 - гіпохромні ядра; * - P <0,01; ** - P <0,001

висновки

Отже, введення розведення препарату Радіесс виробляти до ряду структурних змін в дермі. При розведенні 1: 2 і 1: 6 в терміни спостереження, відповідні 2 і 4 місяців, відбувається активація клітинного компонента дерми і навколо збережених мікросфер з'являється оболонка, що складається з 2-3 клітинних рядів. Процес неоколлагеногенеза при розведенні 1: 2 в перші 2 місяці спостереження зсувається в бік синтезу колагену III типу. Зі збільшенням дози розведення до 1: 6 позаклітинний фібріллогенезу завершується утворенням колагену I типу. Пролонгування періоду спостереження до 4 місяців підтверджує активацію неоколлагеногенеза I типу. При розведенні Радіесс в співвідношенні 1: 6 спостерігається ефект «занурення філлера», а навколо зони його введення формується сполучнотканинна капсула.

бібліографічна ПОСИЛАННЯ

Могильна Г.М., Фомічова Є.В., Блатт Ю.Є. ХАРАКТЕР МОРФОЛОГІЧНИХ ПЕРЕТВОРЕНЬ дерми В УМОВАХ РОЗВЕДЕННЯ Філер // Сучасні проблеми науки та освіти. - 2017. - № 1 .;
URL: http://www.science-education.ru/ru/article/view?id=26090 (дата звернення: 05.07.2019).

Пропонуємо вашій увазі журнали, что видають у видавництві «Академія природознавства»

(Високий імпакт-фактор РИНЦ, тематика журналів охоплює всі наукові напрямки)