Панретинальная визуализация оптических зондов с помощью клеточного разрешения с использованием простого фундоскопа

1. Ади Шейтер
2. Лимор Цур
3. Наируз Фарах
4. Инна Реуцкий-Гефен
5. Ишай Фалик
6. Застенчивый Шохам
7. Аннотация
8. методы
9. Результаты
10. Выводы
11. Актуальность перевода
12. Вступление
13. методы
14. Результаты
15. обсуждение
16. Подтверждения
17. Рекомендации

Transl Vis Sci Technol. 2012; 1 (2): 4.

Ади Шейтер

1Факультет биомедицинской инженерии, Технион - Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль

Лимор Цур

1Факультет биомедицинской инженерии, Технион - Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль

Наируз Фарах

1Факультет биомедицинской инженерии, Технион - Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль

Инна Реуцкий-Гефен

1Факультет биомедицинской инженерии, Технион - Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль

2Департамент медицинской инженерии, Академический центр им. Руппина, Эмек Хефер, Израиль

Ишай Фалик

3 Кафедра офтальмологии, Университетская клиника Хадасса, Эйн Карем, Иерусалим, Израиль

Застенчивый Шохам

1Факультет биомедицинской инженерии, Технион - Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль

1Факультет биомедицинской инженерии, Технион - Израильский технологический институт, Хайфа, Израиль

2Департамент медицинской инженерии, Академический центр им. Руппина, Эмек Хефер, Израиль

3 Кафедра офтальмологии, Университетская клиника Хадасса, Эйн Карем, Иерусалим, Израиль

Шой Шохам, доктор философии, факультет биомедицинской инженерии, Технион - Израильский технологический институт, Технион Сити, Хайфа 32000, Израиль. Эл. адрес: li.ca.noinhcet.mb@mahohss

Получено 2012 30 марта; Принято 2012 10 августа.

Эта статья была цитируется другие статьи в PMC.

Аннотация

Цель

Чтобы получить и охарактеризовать клеточно-разрешенные in vivo флуоресцентные изображения оптогенетических зондов, экспрессированных в ганглиозных клетках сетчатки грызунов, путем адаптации недорогой и простой системы глазного дна на основе актуального эндоскопа.

методы

Была построена индивидуальная система глазного дна на основе эндоскопа (адаптированная по проекту Paques и его коллег). Изображения светлого поля и флуоресценции были получены от трансгенных мышей с фиксированной головой, экспрессирующих Channelrhodopsin2-eYFP, и крыс Sprague Dawley, вирусно трансфицированных оптогенетическим зондом GCaMP3. Изображения сравнивали с изображениями in vitro тех же структур и анализировали.

Результаты

Система глазного дна обеспечивает высококачественные флуоресцентные изображения с высоким разрешением глазного дна, которые охватывают всю сетчатку. Изображения позволяют разделить отдельные клетки и пучки аксонов у мышей Channelrhodopsin2-eYFP и структуры клеточного масштаба у крыс, экспрессирующих GCaMP3. Было установлено, что разрешение в глазах мыши лучше, чем 20 мкм (полная ширина на половине максимума) и лишь незначительно зависит от размытия, связанного с движением.

Выводы

Система флюоресцентно-эндоскопической защиты глазного дна предоставляет мощный, но простой и широко доступный инструмент для получения флуоресцентных изображений оптического и других флуоресцентных зондов с разрешенной клеткой.

Актуальность перевода

Новая система может оказаться основным инструментом для неинвазивной визуализации сетчатки мелких животных in vivo в широком спектре приложений трансляционного зрения, включая отслеживание флуоресцентно меченных клеток и экспрессию генотерапевтических и оптогенетических векторов.

Ключевые слова: протез сетчатки, генная терапия, камера глазного дна, флуоресцентные белки, индикаторы кальция, каналродопсин

Вступление

Среди многих новых приложений оптогенетики в нейронной науке и технике 1 Есть несколько, которые могут оказать существенное влияние на технологию трансляционного зрения. Например, способность искусственно стимулировать нечувствительные к свету нейроны в сетчатке вдохновила несколько новых концепций восстановления зрения при наружных дистрофиях сетчатки. 2 - 6 Кроме того, появление генетически закодированных репортеров активности создает возможность мониторинга ответов в целевых популяциях клеток сетчатки во время обработки визуальной информации. 7 , 8 Тем не менее, широкое развитие этих новых приложений требует подходящих инструментов для мониторинга экспрессии и функции оптогенетических зондов, прежде всего в моделях грызунов. На сегодняшний день большинство оптогенетических исследований сетчатки экспрессии и функции на клеточном уровне проводились in vitro; однако способность контролировать эти аспекты in vivo весьма желательна.

Микроскопическое изображение глазного дна у грызунов в настоящее время выполняется с использованием относительно сложных и дорогих систем. К ним относятся сканирующие лазерные офтальмоскопы с адаптивной оптикой 9 - 11 и коммерческая система глазного дна для визуализации мелких животных. 12 , 13 Двухфотонная микроскопия также используется для определения генетически закодированного индикатора у рыбок данио in vivo. 8 Хотя эти системы, в принципе, способны к микроскопической флюоресцентной визуализации глазного дна, их применение для оптогенетической клеточной визуализации еще предстоит продемонстрировать, возможно, из-за того, что они не легко доступны для исследователей трансляционного зрения. Настоящее исследование демонстрирует микроскопические, клеточно-разрешенные флуоресцентные изображения клеток ганглия сетчатки (RGCs), экспрессирующих оптогенетические зонды Channelrhodopsin2-eYFP (ChR2-eYFP) и GCaMP3, путем адаптации простого и недорогого фундоскопа, представленного Paques, Guyomard, Simonutti и др. 14 , 15 Производительность системы была охарактеризована с помощью физических измерений и путем сравнения их с полученными in vitro изображениями идентичной идентифицированной популяции клеток.

методы

Эксперименты на животных проводились в соответствии с Институциональным комитетом по уходу за животными при Технионе, Израильском технологическом институте, в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных, разработанным Национальными институтами здравоохранения, и соблюдали Заявление ARVO об использовании Животные в исследованиях офтальмологии и зрения.

Два штамма животных были использованы для разных оптогенетических целей. Использовали взрослых мышей из трансгенной линии: мышей, экспрессирующих ChR2-eYFP под промотором Thy1.2 (от 7 недель до 4 месяцев, штамм: B6.Cg-Tg (Thy1-COP4 / EYFP) 9Gfng / J, Jackson Laboratories, Bar Гавань, ME). Кроме того, аденоассоциированный вирус, экспрессирующий генетически кодированный кальциевый индикатор GCaMP3 (AAV2 / 9. HSynap .GCaMP3.3.SV40, Penn Vector Core, Филадельфия, Пенсильвания), был интравитреально инъецирован крысам Sprague Dawley (SD) (Harlan Laboratories, Реховот, Израиль). Крыс SD (от 3 до 4 недель) анестезировали, используя смесь кетамина (132 мг / кг массы тела), ксилазина (8 мг / кг массы тела) и ацепромазина (2,8 мг / кг массы тела). Каплю местного анестетика (Localine) наносили на правый глаз, после чего зрачок расширяли с помощью 1% атропина сульфата (Atrospan). Затем пункция вдоль границы склеры роговицы была выполнена с помощью скошенной иглы 25-го калибра. Используя тупую иглу 31-го калибра (800 RN, Hamilton, Reno, NV), 2 мкл вируса вводили интравитреально через ранее сделанную пункцию.

Визуализация выполнялась с использованием адаптации системы фундускопии, представленной Paques, Guyomard, Simonutti и соавт. 14 Эндоскоп с отоскопом наружного диаметра 3 мм и серповидной подсветкой (Tele Otoscope BERCI 1218 AA, Endoscopy Karl Storz, Туттлинген, Германия) располагался перед установленным на кубе светоделителем (BS) или дихроичным зеркалом (DM) (). Цифровая камера (D5000 с объективом Nikkor 80-200 мм f / 2.8 AF-D, Nikon, Токио, Япония) была расположена перпендикулярно BS / DM. Источником света была ртутная лампа (Intensilight, Nikon, Япония). Оптическое волокно источника света было подключено к эндоскопу через изготовленный на заказ адаптер, который позволял легко вводить и заменять оптические фильтры. Изображения в светлых полях были получены с использованием фильтра длинных частот возбуждения 400 нм (FGL400, Thorlabs, Newton, NJ). Флуоресцентные изображения получали с использованием 470 нм возбуждающего фильтра (XF1013, Omega, Brattleboro, VT), размещенного в адаптере, и эмиссионного фильтра 535 нм (HQ535 / 50x, Chroma, Bellow Falls, VT), расположенного перед объективом камеры. Обычно используемые настройки камеры: качество изображения: сырое; ручной режим работы и фокус (установлен на ∞); диафрагма: F2,8; ISO 3200; Фокусное расстояние: 110 мм. Мощность освещения, измеренная на кончике эндоскопа, составляла от 1,5 до 5,5 мВт, а скорость затвора выбирали в соответствии с используемой мощностью освещения: для изображений в светлых полях скорость затвора была установлена ​​в диапазоне от 1/50 до 1/10 секунды, и для флуоресцентных изображений скорость затвора была установлена ​​между 2 и 10 секундами.

(A) Системная схема. 1: флуоресцентный источник света, 2: фильтр возбуждения, 3: глаз in vivo, 4: эндоскоп, 5: DM / BS, 6: фильтр излучения, 7: объектив, 8: ПЗС, 9: вспомогательный источник света. (B) Фотография установки. (C) Увеличение эндоскопа и изготовленного на заказ адаптера.

Для проведения сеансов визуализации мышей анестезировали путем внутрибрюшинной инъекции кетамина (50 мг / кг массы тела) и медетомидина (1 мг / кг массы тела). Крыс анестезировали путем внутрибрюшинной инъекции кетамина (50 мг / кг массы тела), ксилазина (6,25 мг / кг массы тела) и ацепромазина (1,25 мг / кг массы тела). Зрачки были расширены с каплями Atrospan. Животных располагали так, чтобы глаз едва касался кончика эндоскопа, и каплю солевого раствора (NaCl 0,9%) использовали для увлажнения глаза и связывания с эндоскопом. Чтобы минимизировать движение головы мыши во время визуализации, хирургически имплантировали металлический стержень на череп (закрепленный зубным акрилом), который был закреплен во время визуализации с помощью миниатюрного зажима (головы крыс стабилизировали с помощью ограничителя рта). Необработанные изображения обрабатывались с использованием инструментов обработки изображений (ImageJ и Photoshop, Adobe Corporation, Сан-Хосе, Калифорния). Необработанные изображения были преобразованы в файлы Tiff, и зеленый канал был извлечен. Обработка изображений включала программный биннинг и настройки контрастности и яркости. При качественном сравнении изображений, полученных с различными увеличениями, но в остальном одинаковыми параметрами, гистограммы разных изображений были смещены для получения равных средних значений яркости, чтобы компенсировать изменение уровней яркости.

Флуоресцентные изображения изолированных сетчатки получали с помощью инвертированного микроскопа (TE-2000U, Nikon, Япония), оборудованного камерой устройства с заряженной парой (CCD) (C8484-05G, Hamamatsu Photonics, Ammersee, Германия), через 10X (числовая апертура [ NA] = 0,25) или объектив 20X (NA = 0,5). Двухфотонные изображения получали с помощью изготовленного на заказ микроскопа с объективом 40Х (NA = 0,8, Nikon, Япония), на длине волны 910 нм и разрешении 512 × 512 пикселей.

Результаты

Чтобы исследовать рабочие характеристики системы, у трансгенных мышей, экспрессирующих ChR2-eYFP, были получены изображения яркого поля и флуоресцентного глазного дна. Репрезентативные изображения в а. На флуоресцентных изображениях аксоны и отдельные RGCs могут быть четко визуализированы (), хотя они выглядят умеренно оптически размытыми по сравнению с изображениями in vitro изолированных сетчатки (). В этих сетчатках доля ганглиозных клеток сетчатки, экспрессирующих ChR2-eYFP, составляла порядка 30-40%. 16

In vivo и in vitro изображения ChR2, экспрессирующих RGCs, у мыши B6.Cg-Tg (Thy1-COP4 / eYFP). (A) Изображение глазного дна в ярком поле и (B) изображение глазного дна, полученное in vivo. (C) Увеличение (B). (D) Флуоресцентное изображение изолированной ChR2-экспрессирующей сетчатки, помещенной на решетку микроэлектродов.

Чтобы проверить воспроизводимость метода, через неделю проводились сеансы последующей визуализации у трансгенных мышей, экспрессирующих ChR2-eYFP. Как показано в, отдельные RGCs были легко идентифицированы в обоих сеансах визуализации; незначительные различия между изображениями были обусловлены изменениями в выравнивании эндоскопа с расширенным зрачком, что привело к различиям в равномерности освещения.

Повторная визуализация ChR2-eYFP, экспрессирующих RGCs, разделенных на 1 неделю. (AB), (CD) Одинаковые подполя в двух сетчатках; стрелки указывают репрезентативные клетки, которые были видны в обоих сеансах визуализации.

Производительность системы была количественно охарактеризована путем выведения функции разброса точек (PSF) системы. На основании микрофотографий in vitro предполагалось, что проекции аксонов имеют пренебрежимо малые диаметры относительно PSF, и поэтому их наблюдаемая ширина использовалась в качестве консервативной оценки PSF. Профили интенсивности были взяты вдоль 20 поперечных сечений проекций аксонов на изображении глазного дна анестезированной мыши, экспрессирующей ChR2, как показано на рисунке, и были снабжены гауссовой кривой согласно критерию минимального среднего квадрата ошибки. Была оценена полная ширина на половине максимума (FWHM) каждой из подогнанных кривых (), и PSF, который был оценен как среднее значение FWHM, имел диаметр 18,3 ± 0,7 мкм (среднее значение ± SEM, n = 4 глаза) , Чтобы оценить влияние движения от дыхания на разрешение (у животного с фиксированной головой), PSF от живого животного (18,5 ± 1,2 мкм, среднее значение ± SEM) сравнивали с таковым у того же животного после эвтаназии ( 17,0 ± 1,5 мкм, среднее значение ± SEM). Результаты показали, что влияние дыхания на разрешение было относительно небольшим. Для дальнейшей проверки полученных размеров PSF изображение in vivo () сравнивали с изображением, полученным in vitro и размытым с помощью гауссовского фильтра диаметром 20,0 мкм (), что показало хорошее согласие. Влияние оптического увеличения объектива камеры на разрешение было исследовано путем получения той же сцены глазного дна с фокусными расстояниями 95, 110, 135 и 200 мм (см. Сравнение той же обрезанной области). Полученные диаметры PSF были примерно такими же, как в пределах 5% (меньше, чем отклонения измерения), и не показывали никаких тенденций, указывая на то, что влияние оптического увеличения на эффективное разрешение было незначительным.

Оценка эффективности разрешения системы. (A) Флуоресцентное изображение глазного дна RGs, экспрессирующих ChR2-eYFP, у мыши B6.Cg-Tg (Thy1-COP4 / eYFP). Белые отметки иллюстрируют линии, вдоль которых могут быть взяты профили интенсивности аксонов. (B) Три профиля интенсивности, взятые по сечениям различных аксонов, снабженных кривыми Гаусса. Столбцы ниже иллюстрируют FWHM кривых. (C) Увеличенное изображение глазного дна (та же сетчатка, что и на (A)). (D) Флуоресцентное изображение in vitro изолированной сетчатки, экспрессирующей ChR2-eYFP (такое же, как на рисунке), размытое гауссовым фильтром, FWHM = 20,0 мкм. (E) Увеличенная область, обрезанная на изображениях глазного дна, снятых с фокусным расстоянием: 95, 110, 135 и 200 мм (слева направо). Эффективное разрешение выглядит аналогичным, в соответствии с количественными измерениями.

Наконец, способность системы визуализировать зонды in vivo, сообщающие о клеточной активности, была исследована. С этой целью также были получены флуоресцентные изображения глазного дна сетчатки крыс, экспрессирующих GCaMP3. Эти примеры показали, что интравитреальные вирусные инъекции привели к высокогетерогенному профилю экспрессии GCaMP3 через несколько слоев сетчатки (и показывают слой RGC) с аксонами, излучающими в зрительный диск (в соответствии с результатами Borghuis, Tian, ​​Lu, et al. ). 7 Сравнение изображений глазного дна in vivo с изображениями, полученными in vitro (и, и, и, соответственно), показало, что эффективное разрешение изображений глазного дна in vivo у этих крыс было несколько ниже, по-видимому, позволяя только визуализировать структуры, содержащие небольшие клеточные кластеры.

In vivo и in vitro флуоресцентные изображения глазного дна RC, экспрессирующих GCaMP3, у крыс SD. (A) - (C) Слева: изображения глазного дна флуоресценции, справа: увеличение области, указанной на левой панели. (D) Эпифлуоресцентное микроскопическое изображение in vitro всей сетчатки глаза, изолированной от глаза в (B). (E) Двухфотонное лазерное сканирующее изображение сетчатки, изолированной от (C). Соответствующие увеличенные поля отмечены.

обсуждение

Было продемонстрировано получение in vivo полученных с помощью клеток флуоресцентных изображений глазного дна оптогенетически трансдуцированных ганглиозных клеток сетчатки, экспрессирующих зонды Channelrhodopsin2 и GCaMP3. Система была адаптирована к недорогому фундоскопу, представленному Paques, Guyomard, Simonutti и др., 14 но тем не менее четко предоставили изображения с благоприятным разрешением по сравнению с изображениями, полученными с использованием коммерчески доступных систем (по сравнению, например, с Dalkara, Byrne, Lee, et al, 12 на рис. 1).

Производительность системы характеризовалась сравнением полученных изображений с изображениями in vitro той же популяции клеток. Расчетное разрешение в глазах мыши () было лучше, чем 20 мкм (FWHM), и четко позволяло различать отдельные идентифицированные клетки. Это разрешение может быть дополнительно улучшено путем применения автономных методов обработки изображений, включая деконволюцию. Дополнительный набор экспериментов исследовал источник этого эффективного разрешения. Было обнаружено, что разрешение у мышей с фиксированной головкой улучшалось лишь незначительно (примерно на 10%), когда движение полностью устранялось, но сильно ухудшалось, когда голова не фиксировалась (не показано). Это говорит о том, что эффективное разрешение в основном ограничивалось функцией оптического рассеяния и, по-видимому, было относительно независимым от оптического увеличения в эффективном диапазоне объектива. Поскольку усечение изображения происходит при f больше 110 мм, это значение часто выбиралось на практике.

Возможность визуализировать клеточно-разрешенные оптогенетические зонды в сетчатке грызунов с использованием простой и высокодоступной техники может способствовать разработке трансляционных стратегий восстановления зрения. Способность системы получать изображения с высоким разрешением может также оказаться полезной для неинвазивного отслеживания in vivo флуоресцентно меченных клеток, мониторинга экспрессии векторов генной терапии и наблюдения за развитием дистрофии сетчатки и бляшек на сетчатке, которые развиваются при болезни Альцгеймера. 13 Кроме того, конструкция системы может позволять проецировать световые стимулы на сетчатку через эндоскоп. В сочетании с генетически закодированными репортерами активности это может дать мощную стратегию для отображения вызванных клетками паттернов активности.

Подтверждения

Авторы благодарят Европейский исследовательский совет (грант № 211055) за финансовую поддержку; Барт Боргуис, Инбар Брош, Тьерри Вассерман, Амит Овед и Шем-Тов Халеви за их советы и помощь; и Loren L. Looger и Исследовательский кампус фермы Janelia Медицинского института Говарда Хьюза за разрешение использовать GCaMP3.

Финансовая поддержка: Европейский исследовательский совет (грант № 211055)

Раскрытие: А. Шейтер, Нет; Л. Цур, Нет; Н. Фара, нет; И. Реуцкий-Гефен, Нет; Й. Фалик, Нет; С. Шохам, нет

Рекомендации

1. Ижар О., Фенно Л. Е., Дэвидсон Т. Дж., Могри М., Дейссерот К. Оптогенетика в нервных системах. Нейрон . 2011; 71 (1): 9–34. [ PubMed ] [ Google ученый ] 2. Bi A, Cui J, Ma YP, Ольшевская Е., Пу М., Дижур А. М. и др. Эктопическая экспрессия родопсина микробного типа восстанавливает зрительные реакции у мышей с дегенерацией фоторецепторов. Нейрон . 2006; 50 (1): 23–33. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ Google ученый ] 3. Томита Н, Сугано Е, Яво Х, Ишизука Т, Исаго Н, Нарикава С. и др. Восстановление зрительного ответа у пожилых крыс с дистрофией RCS с помощью AAV-опосредованного переноса гена channelopsin-2. Инвест Офтальмол Vis Sci . 2007; 48 (8): 3821–3826. [ PubMed ] [ Google ученый ] 4. Лагали П.С., Баля Д., Аватрамани Г.Б., Мунк Т.А., Ким Д.С., Бусскамп В. и др. Светоактивируемые каналы, направленные на включение биполярных клеток, восстанавливают зрительную функцию при дегенерации сетчатки. Nat Neurosci . 2008; 11 (6): 667–675. [ PubMed ] [ Google ученый ] 5. Бусскамп В., Роска Б. Оптогенетические подходы к восстановлению зрительных функций при пигментном ретините. Курр Опин Нейробиол . 2011; 21 (6): 942–946. [ PubMed ] [ Google ученый ] 6. Дорудки М.М., Гринберг К.П., Лю Дж., Силка К.А., Бойден Е.С., Локридж Дж.А. и др. Вирусно доставленный каналродопсин-2 безопасно и эффективно восстанавливает зрительные функции у нескольких моделей слепоты у мышей. Mol Ther . 2011; 19 (7): 1220–1229. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ Google ученый ] 7. Борхуйс Б.Г., Тянь Л., Сюй Ю., Никонов С.С., Варди Н., Земельман Б.В. и др. Отображение световых ответов целевых популяций нейронов в сетчатке грызунов. J Neurosci . 2011; 31 (8): 2855–2867. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ Google ученый ] 8. Dreosti E, Esposti F, Baden T, Lagnado L. In vivo доказательство того, что биполярные клетки сетчатки генерируют шипы, модулированные светом. Nat Neurosci . 2011; 14 (8): 951–952. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ Google ученый ] 9. Рурда А., Ромеро-Борха Ф., Доннелли В., III, Куинер Н., Хеберт Т., Кэмпбелл М. Адаптивная оптика, сканирующая лазерная офтальмоскопия. Опт Экспресс . 2002; 10 (9): 405–412. [ PubMed ] [ Google ученый ] 10. Leung CK, Lindsey JD, Crowston JG, Ju WK, Liu Q, Bartsch DU и др. In vivo визуализация мышиных ганглиозных клеток сетчатки. J Neurosci Методы . 2008; 168 (2): 475–478. [ PubMed ] [ Google ученый ] 11. Грей Д.К., Мериган В., Вольфинг Д.И., Джи Б.П., Портер Дж., Дубра А. и др. In vivo флуоресцентная визуализация ганглиозных клеток сетчатки примата и пигментных эпителиальных клеток сетчатки. Опт Экспресс . 2006; 14 (16): 7144–7158. [ PubMed ] [ Google ученый ] 12. Dalkara D, Byrne LC, Lee T, Hoffmann NV, Schaffer DV, Flannery JG. Усиленная доставка генов в сетчатку новорожденных посредством системного введения AAV9 с мутированным тирозином. Джин Тер . 2011; 19 (2): 176–181. [ PubMed ] [ Google ученый ] 13. Короньо-Хамауи М., Короньо Ю., Любимов А. В., Миллер К. А., Ко М. К., Блэк К. Л. и др. Идентификация амилоидных бляшек в сетчатке от пациентов с болезнью Альцгеймера и неинвазивная in vivo оптическая визуализация бляшек сетчатки на мышиной модели. Нейроизображение . 2011; 54 ((доп. 1)): S204–217. [ PMC бесплатная статья ] [ PubMed ] [ Google ученый ] 14. Paques M, Guyomard JL, Simonutti M, Roux MJ, Picaud S, Legargasson JF, et al. Панретинальная цветная фотография глазного дна с высоким разрешением. Инвест Офтальмол Vis Sci . 2007; 48 (6): 2769-2774. [ PubMed ] [ Google ученый ] 15. Гайомард Ж.Л., Розолен С.Г., Пакес М., Делифер М.Н., Симонутти М., Тессиер Й. и др. Недорогая и простая техника визуализации переднего и заднего сегментов: глазного дна, ресничных органов, иридокорнеального угла. Инвест Офтальмол Vis Sci . 2008; 49 (11): 5168–5174. [ PubMed ] [ Google ученый ] 16. Тьягараджан С., Ван Уик М., Леманн К., Ловел С., Фенг Г., Уассл Х. Зрительная функция у мышей с дегенерацией фоторецепторов и трансгенной экспрессией каналродопсина 2 в ганглиозных клетках. J Neurosci . 2010; 30 (26): 8745–8758. [ PubMed ] [ Google ученый ] Статьи компании Translational Vision Science & Technology предоставлены здесь любезно предоставленной Ассоциацией исследований в области зрения и офтальмологии.

Похожие

Комментарии